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中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜瞬时外向钾电流（I_（to））的影响

作　者: 胡朗吉
导　师: 葛郁芝
学　校: 南昌大学
专　业: 内科学
关键词: 甘松挥发油 膜片钳技术 瞬时外向钾电流 心室肌细胞
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:观察不同浓度中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜瞬时外向钾电流(Transient outward potassium current,Ito)的作用,及甘松挥发油对Ito的量-效曲线、电流-电压(I-V)曲线、激活曲线和失活曲线的影响,探讨中药甘松挥发油抗心律失常作用的离子机制。方法:1.用急性酶解分离法分离大鼠心室肌细胞,以肝素抗凝,戊巴比妥钠麻醉大鼠后,迅速取出大鼠心脏,悬挂于Langendoff灌流系统离体灌流。先以无钙台氏液灌流心脏约5分钟,再以50微摩尔/升(μmol/L)含蛋白酶E(ProNase E)和胶原酶Ⅰ(CollagenNase)的低钙酶液灌流心脏,待心脏质地明显松软,则停止酶液消化,再以200μmol/L低钙台氏液灌流,冲洗灌流系统及心脏中残留酶液,然后剪下心室肌组织块并置于盛有KB液的烧杯中充分剪碎、轻轻吹打、过滤后置于KB液中室温下孵育1-2小时。2.采用标准的全细胞膜片钳技术,选取杆状无收缩、边缘完整、横纹清晰和大小适中的细胞在室温下进行膜片钳电流记录,以电阻为1.0-3.0兆欧姆(MΩ)的玻璃微电极封接大鼠心室肌细胞,形成吉欧高阻封接水平后以适当程度的负压破膜,补偿串联电阻和细胞膜电容(Cm),形成全细胞记录模式,分别测定Ito的量-效曲线、电流-电压(I-V)曲线、激活曲线和失活曲线,观察不同浓度的甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜Ito的影响。结果:1.甘松挥发油可呈浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞膜Ito峰值电流(peak current)。在测试脉冲电压为+70mV时,甘松挥发油浓度为3μg/g、6μg/g、10μg/g和20μg/g对Ito峰值电流的抑制率分别为:(27.01±6.93)%,(51.13±9.82)%,(80.86±4.63)%和(94.81±4.30)% (n=5,P<0.05)。2.甘松挥发油对Ito的电流密度-电压关系曲线(current density-voltage curve,I-V曲线)的影响:在测试脉冲电压为+70mV时,6μg/g甘松挥发油使Ito峰值电流从(23.08±0.74)pA/pF减少到(11.23±1.47) pA/pF (n=5,P<0.05),给药后Ito峰值电流密度减少约50%,给药前后电流密度变化有统计学意义。3.甘松挥发油对Ito激活动力学的影响:在甘松挥发油6μg/g灌流法给药后,激活曲线显示给药前后半数激活电压(V1/2)为:(36.17±3.36)mV vs (32.23±4.41)mV(n=5,P>0.05);斜率因子(S)为:24.00±2.79 vs 28.75±4.50 (n=5,P>0.05)。给药前后半数激活电压和斜率因子变化无统计学意义。4.甘松挥发油对Ito失活动力学的影响:失活曲线显示甘松挥发油使失活曲线明显左移,差异有显著统计学意义:给药前后半数失活电压(V1/2)为(-33.74±0.48)mV vs (-40.54±0.70)mV (n=5,P<0.01);斜率因子(S)为:5.00±0.40 vs 8.42±0.62 (n=5,P<0.01)。结论:1.甘松挥发油可呈浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞膜Ito电流,随着浓度增加阻断作用增强;2.甘松挥发油可使Ito的电流密度-电压关系曲线(I-V曲线)下移;3.甘松挥发油对Ito激活曲线(activation curve)无明显影响;4.甘松挥发油对Ito失活曲线(inactivation curve)有明显影响,给药后失活曲线明显左移,减少Ito电流使心室肌细胞复极化减慢,延长心室肌细胞动作电位有效不应期(ERP),这可能是其抗心律失常作用的机制之一。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
第1章 引言  9-12
第2章 材料与方法  12-19
  2.1 实验用品  12
  2.2 实验溶液配制  12-14
  2.3 电极制备  14
  2.4 实验仪器  14-15
    2.4.1 细胞分离所需实验仪器  14-15
    2.4.2 细胞电生理实验所需实验器材  15
  2.5 实验方法  15-18
    2.5.1 单个大鼠心室肌细胞的制备  15-16
    2.5.2 膜片钳全细胞记录  16-18
  2.6 统计学分析  18-19
第3章 结果  19-30
  3.1 急性分离的大鼠心室肌细胞  19-20
  3.2 大鼠心室肌细胞膜I_(to) 的大小及甘松挥发油的影响  20-22
  3.3 甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜I_(to)作用的量-效曲线  22-24
  3.4 甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜I_(to) 电流密度-电压关系曲线的影响  24-25
  3.5 甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜I_(to) 激活动力学影响  25-27
  3.6 甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜I_(to) 失活动力学影响  27-29
  3.7 溶剂DMSO 对大鼠心室肌细胞膜I_(to) 的影响  29-30
第4章 讨论  30-35
第5章 结论  35-36
致谢  36-37
参考文献  37-41
综述  41-50
  参考文献  46-50
攻读学位期间的研究成果  50

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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