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环境雌激素与抗雌激素对斑马鱼胚胎的复合效应研究

作　者: 向霄
导　师: 周培
学　校: 上海交通大学
专　业: 农药学
关键词: 环境内分泌干扰物斑马鱼胚胎复合效应形态学观察基因表达
分类号: X174
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目前有关环境内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals, EDCs)的复合效应研究主要集中于同类EDCs的联合效应,不同种类EDCs复合效应研究亟需加强。将经典模式生物斑马鱼胚胎暴露于雌激素17β-雌二醇(E2)、o,p’-DDT,抗雌激素它莫昔芬(TAM)、氟维司群及其二元混合物中。观察胚胎孵化率、孵化时间和总畸形率,并用荧光实时定量PCR检测VTG1、VTG2、ERα等雌激素效应相关基因mRNA转录水平。对四种EDCs间复合效应进行分析、评价,以期为全面了解雌激素类与抗雌激素类的复合效应提供一定科学依据。主要研究结果如下:(1)单一EDCs作用对斑马鱼胚胎发育形态学有不同程度的影响;VTG基因被雌激素诱导表达量增加,ERα基因表达被抗雌激素氟维司群所抑制。单独存在的TAM表现出弱雌激素效应。(2)传统观点认为,环境雌激素效应可能会被抗雌激素等物质所平衡,但在胚胎发育形态学水平上,雌激素与抗雌激素混合物并没出现因为雌激素与抗雌激素相互作用而使繁殖毒性减轻的情况。另外,和胚胎孵化时间相比,胚胎孵化率、总畸形率更好地体现出联合毒性效应。(3)在基因转录水平上,雌激素与抗雌激素二元混合物中总体上二者表现出了相互拮抗的效应,即抗雌激素的存在减轻了雌激素效应。不过o,p’-DDT与TAM共暴露组中,高浓度的TAM显示了弱雌激素的作用。上述结论表明抗雌激素并非简单地抑制环境雌激素的生态毒性效应,在进行生态风险评价时需全面评估雌激素与抗雌激素的复合效应。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-12
第一章文献综述  12-28
  1.1 引言  12-13
  1.2 环境内分泌干扰物概述  13-19
    1.2.1 环境内分泌干扰物的定义  13
    1.2.2 环境内分泌干扰物的来源和分类  13-14
    1.2.3 环境内分泌干扰物的危害  14-17
      1.2.3.1 环境内分泌干扰物对动物的危害  14-16
      1.2.3.2 环境内分泌干扰物对人类的危害  16-17
    1.2.4 环境内分泌干扰物的作用机制  17-18
    1.2.5 环境内分泌干扰物复合效应的研究  18-19
  1.3 斑马鱼及其胚胎发育技术  19-27
    1.3.1 斑马鱼简介  19
    1.3.2 斑马鱼的生物学特征  19-20
    1.3.3 斑马鱼的研究发展历程  20-22
    1.3.4 斑马鱼及其胚胎在毒理学研究中的应用  22-26
      1.3.4.1 在一般生态毒性评价中的应用  22-24
      1.3.4.2 在神经毒性、心血管研究等方面的应用  24-25
      1.3.4.3 在环境内分泌干扰物研究中的应用  25-26
    1.3.5 斑马鱼胚胎在毒理学试验中的特点和优势  26-27
  1.4 论文选题依据及意义  27-28
第二章四种环境内分泌干扰物单一作用对斑马鱼胚胎的毒性研究  28-47
  2.1 引言  28-30
  2.2 材料和方法  30-33
    2.2.1 实验药品  30
    2.2.2 仪器设备  30-31
    2.2.3 实验用鱼及其养殖  31
    2.2.4 雌雄鱼配对及胚胎的收集  31
    2.2.5 暴露实验  31
    2.2.6 斑马鱼胚胎形态学观察  31-32
    2.2.7 RNA 的提取与反转录  32
    2.2.8 基因表达分析  32
    2.2.9 数据分析  32-33
  2.3 结果与分析  33-46
    2.3.1 单一化合物暴露对斑马鱼胚胎的形态学影响  33-43
      2.3.1.1 E_2暴露对斑马鱼胚胎的形态学影响  33-37
      2.3.1.2 TAM 暴露对斑马鱼胚胎的形态学影响  37-39
      2.3.1.3 o,p'-DDT 暴露对斑马鱼胚胎的形态学影响  39-41
      2.3.1.4 氟维司群暴露对斑马鱼胚胎的形态学影响  41-43
    2.3.2 单一化合物暴露对斑马鱼胚胎雌激素相关基因表达的影响  43-46
      2.3.2.1 E_2暴露对斑马鱼胚胎雌激素效应相关基因表达的影响  43-44
      2.3.2.2 TAM 暴露对斑马鱼胚胎雌激素效应相关基因表达的影响  44
      2.3.2.3 o,p'-DDT 暴露对斑马鱼胚胎雌激素效应相关基因表达的影响  44-45
      2.3.2.4 氟维司群暴露对斑马鱼胚胎雌激素效应相关基因表达的影响  45-46
  2.4 本章小结  46-47
第三章 E_2与TAM、氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎的毒性研究  47-59
  3.1 引言  47-48
  3.2 材料和方法  48-49
    3.2.1 实验药品  48
    3.2.2 仪器设备  48
    3.2.3 实验用鱼及其养殖  48
    3.2.4 雌雄鱼配对及胚胎的收集  48
    3.2.5 暴露实验  48
    3.2.6 斑马鱼胚胎形态学观察  48
    3.2.7 RNA 的提取与反转录  48-49
    3.2.8 基因表达分析  49
    3.2.9 数据分析  49
  3.3 结果与分析  49-57
    3.3.1 E_2和TAM共暴露对斑马鱼胚胎形态学的影响  49-52
      3.3.1.1 E_2和TAM共暴露对斑马鱼胚胎孵化率的影响  49-50
      3.3.1.2 E_2和TAM共暴露对斑马鱼胚胎总畸形率的影响  50-51
      3.3.1.3 E_2和TAM共暴露对斑马鱼胚胎孵化时间的影响  51-52
    3.3.2 E_2和TAM共暴露对斑马鱼胚胎雌激素效应相关基因表达的影响  52-53
    3.3.3 E_2和氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎形态学的影响  53-56
      3.3.3.1 E_2和氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎孵化率的影响  53-54
      3.3.3.2 E_2和氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎总畸形率的影响  54-55
      3.3.3.3 E_2和氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎孵化时间的影响  55-56
    3.3.4 E_2和氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎雌激素效应相关基因表达的影响  56-57
  3.4 本章小结  57-59
第四章 o,p'-DDT 与TAM、氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎的毒性研究  59-69
  4.1 引言  59
  4.2 材料和方法  59-60
    4.2.1 实验药品  59
    4.2.2 仪器设备  59-60
    4.2.3 实验用鱼及其养殖  60
    4.2.4 雌雄鱼配对及胚胎的收集  60
    4.2.5 暴露实验  60
    4.2.6 斑马鱼胚胎形态学观察  60
    4.2.7 RNA 的提取与反转录  60
    4.2.8 基因表达分析  60
    4.2.9 数据分析  60
  4.3 结果与分析  60-68
    4.3.1 o,p'-DDT 和TAM 共暴露对斑马鱼胚胎形态学的影响  60-63
      4.3.1.1 o,p'-DDT 和TAM 共暴露对斑马鱼胚胎孵化率的影响  60-62
      4.3.1.2 o,p'-DDT 和TAM 共暴露对斑马鱼总畸形率的影响  62
      4.3.1.3 o,p'-DDT 和TAM 共暴露对斑马鱼孵化时间的影响  62-63
    4.3.2 o,p'-DDT 和TAM 共暴露对斑马鱼胚胎雌激素效应相关基因表达的影响  63-64
    4.3.3 o,p'-DDT 和氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎形态学的影响  64-67
      4.3.3.1 o,p'-DDT 和氟维司群共暴露对斑马鱼孵化率的影响  64-65
      4.3.3.2 o,p'-DDT 和氟维司群共暴露对斑马鱼总畸形率的影响  65-66
      4.3.3.3 o,p'-DDT 和氟维司群共暴露对斑马鱼孵化时间的影响  66-67
    4.3.4 o,p'-DDT 和氟维司群共暴露对斑马鱼胚胎雌激素效应相关基因表达的影响  67-68
  4.4 本章小结  68-69
第五章结论与展望  69-71
  5.1 结论  69-70
  5.2 展望  70-71
参考文献  71-84
致谢  84-85
攻读硕士学位期间学术论文  85-87

环境雌激素与抗雌激素对斑马鱼胚胎的复合效应研究

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