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熊果酸对人皮肤鳞癌的抑制作用及机制研究

作　者: 赵思成
导　师: 骆丹
学　校: 南京医科大学
专　业: 皮肤性病学
关键词: A431细胞熊果酸 NF-кB信号通路 BALB/c裸鼠
分类号: R739.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景和目的:近年来皮肤癌特别是鳞状细胞癌(以下简称鳞癌)的发生率明显上升,是一种侵袭性较强的肿瘤,预后较差。熊果酸(Ursolic acid,UA)是存在于天然植物中的一种三萜类化合物,是多种抗癌中草药的主要抗肿瘤活性成分之一。研究表明,UA对多种肿瘤具有明显的抑制作用,但其抗肿瘤的确切机制和途径尚未完全明确。目前有关UA对人皮肤鳞癌是否具有抗癌作用及其机制尚报道较少。核转录因子кB(uclear factor—kappa B,NF-кB)是近年来发现的转录调控因子NF-кB, NF-кB可通过调控Bcl-2、IAPs、TRAF等抗凋亡基因的表达,抑制肿瘤细胞凋亡。本文将观察UA能否减少裸鼠荷瘤的生长体积和质量,并探讨UA是否能通过NF-кB通路诱导皮肤鳞癌细胞凋亡,为皮肤鳞癌的临床用药提供基础证据。方法:1.细胞培养:培养人皮肤鳞癌细胞株A431细胞和人皮肤角质形成细胞株HaCaT细胞。2.肿瘤接种及给药:取A431细胞悬液接种于雄性BALB/c裸鼠裸鼠左腋下,接种后10天给药,以腹腔注射方式给予UA,以氟尿嘧啶(5-FU)做对照,隔日注射一次,共10次。3.肿瘤鉴定:取肿瘤组织HE切片进行组织鉴定。4.药物安全性观察:观察给药后小鼠的身体状况,包括皮肤色泽、饮食,大小便、精神状态等并取肝、脾病理切片观察细胞坏死程度。5. UA抑癌作用观察:隔日一次测量肿瘤长径a(mm),及相垂直短径b(mm),并用公式V(mm3)=(a×b~2)×1/2计算体积,20日后剥离肿瘤称重.。抑制率(%)=(对照组平均瘤重—实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%6. UA对皮肤鳞癌细胞增殖活性影响:以MTT法检测不同浓度UA及5-FU对A431细胞增殖活性变化并筛选合适药物浓度。7. UA对皮肤鳞癌细胞凋亡率影响:以流式细胞仪和Hoechst染色检测细胞凋亡水平变化。8. UA对NF-кB信号通路相关蛋白表达影响:分别提取用药后不同时间细胞蛋白,以Western blot法检测pIкBα、Bcl-2、c-IAP-2和IкBα蛋白表达水平。结果1.接种肿瘤组织鉴定:经病理组织学鉴定荷瘤鼠皮肤内所取组织为为皮肤鳞癌。2.药物安全性:UA组药物生理副作用小于5-FU组。3. UA抑癌作用: UA能明显抑制裸鼠皮肤鳞癌组织生长,并呈浓度依赖性。4. UA对皮肤鳞癌细胞增殖活性影响:UA对A431细胞增殖活性有显著抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。UA对HaCaT细胞的增殖的抑制作用却远低于5-FU。5. UA对皮肤鳞癌细胞凋亡率影响: UA能诱导A431细胞凋亡,并呈浓度依赖性,但对HaCaT细胞凋亡率低于5-FU。6. NF-кB信号通路相关蛋白表达变化:pIкBα、Bcl-2、c-IAP-2的表达水平逐渐下降,IкBα蛋白的表达水平逐渐增高。结论UA对裸鼠皮肤鳞癌有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。UA对A431细胞增殖活性具有明显的抑制作用。UA能明显诱导A431细胞凋亡,且有较特异的杀伤作用。UA可能通过阻断NF-кB通路,进而引起Bcl-2和c-IAP2等抗凋亡基因的表达减少,从而诱导皮肤鳞癌细胞凋亡。

全文目录

实验流程图  4-5
全文主要缩略语  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-12
论文正文  12-34
  材料与方法  12-22
  结果  22-32
  讨论  32-34
参考文献  34-41
本文小結  41-42
附录  42-52
  HPV E6 蛋白和它在致癌过程中作用的靶蛋白  42-51
    参考文献  47-51
  研究生期间发表论文情况  51-52
  致谢  52

熊果酸对人皮肤鳞癌的抑制作用及机制研究

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