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黄芩苷在中国对虾体内的代谢及对诺氟沙星残留消除规律的影响研究

作　者: 李小彦
导　师: 李健；潘鲁青
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水产养殖
关键词: 黄芩苷诺氟沙星中国对虾代谢 CYP450 GST 残留消除
分类号: S948
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

水产药物在水产动物病害防治中占有重要的地位,同时可以促进动物生长,提高养殖效益。其中抗生素在水产养殖中的应用较多,抗生素的使用在一定程度上控制了细菌性疾病的发展,却也给水产养殖业带来了诸多问题,如药物残留事件及耐药性问题频频出现,引起了人们对水产品安全的高度重视。中草药因其低毒、低残留、不易产生耐药性等优点已逐渐开始应用于水产养殖业,大力开展中草药在水产养殖病害防治中的应用研究以及开发无公害渔药,对水产品安全以及人类的健康都有着非常重要的意义,但是中草药在实际应用中也存在一定的缺陷,如用药量大,发挥药效较慢,基础研究缺乏,多为经验给药等。鉴于此,人们开始将中西药联合起来应用于水产养殖中,中西药联合使用逐渐成为一种趋势。然而,中西药联合使用后在水产动物体内的作用机理,中草药与西药彼此之间的相互影响,联合用药后药动学及药效学的变化等方面的报道较少,联合用药缺乏有效的指导。本研究以此为切入点,以重要的水产动物中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)为研究对象,研究黄芩苷在中国对虾体内的代谢及对诺氟沙星残留消除规律的影响,研究主要分为以下两部分：一、黄芩苷在中国对虾体内的代谢消除规律及对药物代谢酶的影响以中草药黄芩苷作为受试药物,中国对虾连续7d给予100mg/kg黄芩苷药饵,HPLC法测定对虾不同组织中的黄芩苷含量,建立适合中国对虾的黄芩苷含量的测定方法,研究黄芩苷在中国对虾不同组织中的代谢及残留消除规律。用紫外分光光度法及荧光分光光度法分别测定中国对虾肝胰腺及鳃中APND、GST、ECOD三种药物代谢酶的活性,探讨黄芩苷对三种酶活性的影响,从酶活水平上研究黄芩苷对中国对虾的作用机理。在此基础上以药物代谢规律作为药动学指标,药物代谢酶活性作为药效学指标,建立黄芩苷在对虾体内的PKPD模型。结果表明,HPLC法黄芩苷与杂质分离良好,4个浓度水平的黄芩苷在不同组织中的平均回收率在80.57%-96.25%之间,日内精密度在3.26%-5.85%之间,日间精密度在3.88%-5.73%之间。与其它给药方式相比,黄芩苷药饵给药吸收较慢,在血液、肝胰腺、肌肉、鳃中的Tmax依次为6h,3h,6h,3h；黄芩苷在不同组织中的分布为肝胰腺>鳃>血液>肌肉。黄芩苷在肝胰腺、鳃、肌肉、血液中的t1/2β分别为29.62h,27.50h,25.20h,23.73h,消除速度从快到慢依次为血液>肌肉>鳃>肝胰腺；与一些水产常用的抗生素相比,黄芩苷残留较少,在本试验条件下肌肉和血液中5d已降到检测限以下,肝胰腺及鳃7d降到检测限以下。从酶活性试验结果可知,中国对虾连续7d投喂黄芩苷药饵(100mg/kg)后,黄芩苷对几种酶均有不同程度的诱导作用,酶的活性均呈现先升高后降低的趋势：肝胰腺和鳃中APND活性均在3h左右达到最高,ECOD活性均在1h左右达到最高,而GST活性迟于两种CYP450酶被诱导,两组织GST活性分别在6h、12h达到最高水平。在此基础上建立的PKPD模型符合一元三次方程,且回归系数较高,黄芩苷在中国对虾体内的药物含量与酶活性的变化具有较直接的关系。本试验为含黄芩苷的药物的应用提供科学依据,在临床用药中应考虑到黄芩苷对药物代谢酶的诱导作用,适当用药,合理配伍。二、黄芩苷对诺氟沙星残留消除规律的影响研究中国对虾分为空白对照组、单一用药组,联合用药组三组：空白对照组连续15d投喂空白饵料；单一用药组连续5d投喂诺氟沙星药饵,之后投喂空白饵料10d；联合用药组连续5d投喂诺氟沙星药饵,之后连续投喂黄芩苷药饵10d。用HPLC法测定单一用药组与联合用药组中国对虾体内诺氟沙星含量的变化,同时用紫外分光光度法及荧光分光光度法测定三组中国对虾肝胰腺中APND、ECOD、GST三种药物代谢酶活性的变化。结果表明：从代谢消除规律来看,中国对虾联合用药组不同组织中诺氟沙星含量逐渐低于单一用药组,代谢消除速度加快。从残留情况来看,单一用药组在停止投喂诺氟沙星药饵后10d肝胰腺中仍有残留,而联合用药组此时已检测不到药物残留；单一用药组与联合用药组在停止投喂诺氟沙星10d肌肉。中均检测不到药物残留,在7d单一用药组含量为0.027μg/ml,而联合用药组已降到0.01μg/ml;单一用药组在停药7d血液中药物含量降到检测限以下,而联合用药组6d已降到检测限以下；单一用药组停止投喂诺氟沙星后10d鳃中药物含量为0.011μg/ml,而联合用药组在7d已降到检测限以下。此外,诺氟沙星与黄芩苷合用后在各组织中的t1/2β明显缩短,联合用药组的理论休药期比单一用药组分别减少了19.71%、23.92%、25.92%、27.82%,说明黄芩苷对诺氟沙星在中国对虾体内的消除有一定的促进作用。从酶活实验可以看出,单一用药组APND酶活性先降低后逐渐恢复至对照组水平,在第5d及第6d显著低于对照组水平(P<0.05),联合用药组APND活性先降低后逐渐升高,也在第5d与第6d时显著低于对照组(P<0.05),在第15d时极显著高于对照组水平(P<0.01),在其它时间都与对照组无明显差异(P>0.05)；对于ECOD酶而言,单一用药组ECOD酶活性也逐渐降低后逐渐恢复至对照组水平,第8d、第10d极显著低于对照组(P<0.01),第12d仍显著低于对照组水平(P<0.05),而联合用药组只在第8d才表现出明显的抑制作用(P<0.05),第15d时表现出明显诱导作用,与对照组差异极显著(P<0.01),其它时间都与对照组无明显差异(P>0.05)；GST酶活性在投喂诺氟沙星后也表现出抑制作用,单一用药组在第5d、6d、8d时极显著低于对照组水平(P<0.05),而联合用药组只第5d、6d时与对照组相比表现出明显的抑制作用(P<0.05),在15d时表现出诱导作用,与对照组差异显著(P<0.05),其它时间都与对照组无明显差异(P>0.05)。综合药物消除规律及酶活实验可以看出,黄芩苷可能通过诱导药物代谢酶的活性而加速诺氟沙星在中国对虾体内的消除。

全文目录

摘要  5-8
Abstract  8-14
第一章文献综述  14-24
  1 我国水产用药的现状  14-18
    1.1 水产药物的种类  14-15
    1.2 水产用药存在的问题  15-16
    1.3 水产药物残留的现状及控制措施  16-18
  2 氟喹诺酮类药物在水产上的应用现状  18-19
  3 中草药在水产养殖中的应用现状  19-20
  4 中西药联合应用的特点  20-21
  5 药物代谢酶概述  21-24
    5.1 细胞色素P450酶  21-22
    5.2 GST酶  22
    5.3 药物代谢酶与药物之间的相互作用  22-24
第二章黄芩苷在中国对虾体内的代谢消除规律及对药物代谢酶活性的影响  24-44
  第一节黄芩苷在中国对虾体内的代谢及残留消除规律  24-31
    1 材料与方法  24-26
      1.1 实验动物  24-25
      1.2 药品与试剂  25
      1.3 试验设计  25
      1.4 样品处理及HPLC工作条件  25-26
      1.5 线性范围及最低检测限  26
      1.6 回收率和精密度  26
      1.7 统计分析  26
    2 实验结果  26-28
      2.1 线性范围与最低检测限  26
      2.2 回收率及精密度  26
      2.3 黄芩苷多次给药后在中国对虾体内的代谢特征  26-28
      2.4 黄芩苷在中国对虾体内的残留消除规律  28
    3 讨论  28-31
      3.1 黄芩苷测定方法的探讨  28-29
      3.2 黄芩苷多次给药后在中国对虾体内的代谢特征  29
      3.3 黄芩苷在中国对虾体内的残留消除规律  29-30
      3.4 临床用药建议  30-31
  第二节黄芩苷对中国对虾CYP450s酶及GST酶活性的影响  31-38
    1 材料与方法  31-33
      1.1 实验材料  31-32
      1.2 药品与试剂  32
      1.3 方法  32-33
      1.4 数据处理  33
    2 结果  33-35
      2.1 黄芩苷对中国对虾APND活性的影响  33
      2.2 黄芩苷对中国对虾ECOD活性的影响  33
      2.3 黄芩苷对中国对虾GST活性的影响  33-35
    3 讨论  35-38
      3.1 黄芩苷对中国对虾APND活性的影响  35
      3.2 黄芩苷对中国对虾ECOD活性的影响  35-36
      3.3 黄芩苷对中国对虾GST活性的影响  36-37
      3.4 CYP450的诱导与联合用药  37-38
  第三节黄芩苷在中国对虾体内的PKPD模型研究  38-44
    1 材料与方法  39
      1.1 实验材料  39
      1.2 药品与试剂  39
      1.3 实验方法  39
      1.4 数据处理  39
    2 实验结果  39
      2.1 中国对虾肝胰腺及鳃中黄芩苷含量和药效指标经时变化图  39
      2.2 中国对虾肝胰腺及鳃黄芩苷含量和药物效应关系表达式  39
    3 讨论  39-44
第三章黄芩苷对诺氟沙星残留消除规律的影响研究  44-60
  第一节黄芩苷对诺氟沙星残留消除规律的影响  44-52
    1 材料与方法  45-46
      1.1 实验动物  45
      1.2 药品与试剂  45
      1.3 实验设计  45
      1.4 样品处理及HPLC工作条件  45-46
      1.5 线性范围、最低检测限、回收率及精密度  46
      1.6 数据处理  46
    2 实验结果  46-49
      2.1 线性范围和最低检测限  46
      2.2 回收率及精密度  46-47
      2.3 两种给药方案下中国对虾在不同组织中的药时曲线图  47-49
      2.4 中国对虾单一用药组和联合用药组诺氟沙星消除曲线方程和参数  49
    3 讨论  49-52
      3.1 诺氟沙星在中国对虾体内的残留消除规律研究  49-50
      3.2 黄芩苷对诺氟沙星在中国对虾体内残留消除规律的影响  50-51
      3.3 诺氟沙星联合用药方案的制定  51-52
  第二节黄等普与诺氟沙星联用后中国对虾CYP54s0酶与GST酶活性的变化  52-60
    1 材料与方法  53
      1.1 实验动物  53
      1.2 药品与试剂  53
      1.3 实验设计  53
      1.4 药物代谢酶活性测定方法  53
      1.5 统计分析  53
    2 实验结果  53-54
      2.1 中国对虾不同给药方案下APND酶活性变化趋势  53-54
      2.2 中国对虾不同给药方案下ECOD酶活性变化趋势  54
      2.3 中国对虾不同给药方案下GST酶活性变化趋势  54
    3 讨论  54-60
      3.1 不同给药方案下中国对虾体内APND酶活性的变化趋势  54-56
      3.2 不同给药方案下中国对虾体内ECOD酶活性的变化趋势  56-57
      3.3 不同给药方案下中国对虾体内GST酶活性的变化趋势  57-58
      3.4 诺氟沙星与黄芩苷联合用药探讨  58-60
结论  60-62
参考文献  62-71
附录  71-72
致谢  72-74
攻读硕士期间发表论文  74

黄芩苷在中国对虾体内的代谢及对诺氟沙星残留消除规律的影响研究

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