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雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病模型大鼠突触后致密物蛋白N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基2B和突触后致密物质95的影响

作　者: 桂婷
导　师: 胡小令
学　校: 南昌大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 雷公藤内酯醇 β-淀粉样蛋白 N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基2B 突触后致密物质95
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)的异常代谢及沉积与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发病关系密切,可引起炎症反应和突触毒性作用。AD早期即可发生突触结构的改变,这种改变早于广泛的神经元变性。突触后致密物(post synaptic density,PSD)是突触诸多结构因素中非常敏感易变的一种结构,在突触的可塑性中发挥着重要作用。雷公藤内酯醇(triptolide,TP)是我国独创的一种具有抗炎、免疫抑制作用的药物,TP对AD模型大鼠突触的可塑性是否有一定保护作用,国内外文献尚未见报道。本实验采用凝聚态Aβ1-40注入大鼠海马模拟AD模型,主要观察注射Aβ后海马突触后致密物中N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基2B(N-methyl-D-asparate receptor subunit 2B,NR2B)和突触后致密物质95(postsynaptic density 95,PSD-95)表达的变化以及TP对其的影响,探讨TP对突触可塑性的保护机制,并为寻找防治AD的有效中药提供实验依据。方法:1.凝聚态Aβ1-40定向注射入大鼠左侧海马,建立AD大鼠在体模型,以模拟AD学习记忆障碍,胶质细胞增生,部分神经元损伤等行为学和病理学特征。以同样方法向大鼠左侧海马定向注射等量生理盐水作为对照组。2.术后一周行Morris水迷宫实验,筛选出建模成功的大鼠并随机分为模型组和用药组。用药组每日腹腔注射TP 0.4 mg/kg,共15天,对照组和模型组则每日腹腔注射等容积4%丙二醇溶液,注射时间同用药组。3.采用甲苯胺蓝尼氏染色方法观察各组大鼠海马注射点附近的组织形态学改变;免疫组织化学和RT-PCR方法观察各组大鼠海马中PSD相关蛋白(NR2B和PSD-95)及其mRNA的表达情况。4.采用透射电镜观察各组大鼠海马突触超微结构的变化。结果:1.甲苯胺蓝尼氏染色观察到大鼠海马注射Aβ1-40后,光镜下显示注射点附近海马齿状回背侧颗粒细胞带不完整,局部神经元数量明显减少,出现弥漫性胶质细胞反应。用药组注射点附近神经元丢失程度减轻,神经胶质细胞数较模型组减少。表明TP可能通过抑制Aβ1-40引起的炎症反应,对AD模型大鼠海马神经元起到一定的保护作用。2.免疫组织化学显色示,用药组NR2B和PSD-95阳性细胞数较模型组均明显增多(P<0.01,P<0.05),平均光密度较模型组明显增加(P<0.01),但用药组NR2B和PSD-95阳性细胞数和平均光密度仍比对照组减少和降低(P<0.01)。提示TP可能通过抗炎作用,促进AD模型大鼠海马NR2B和PSD-95蛋白的表达。3.RT-PCR结果表明,用药组NR2B、PSD-95 mRNA的相对含量与模型组比较明显升高(P<0.05),但较对照组低(P<0.05,P<0.01)。提示TP可能通过抗炎作用,促进AD模型大鼠海马NR2B和PSD-95基因mRNA的表达。4.透射电镜观察到模型组海马神经毡内突触数量较对照组减少,突触前囊内突触小泡数量减少且轮廓不清,PSD厚度变薄。用药组海马神经毡内的突触数量及突触前囊内的突触小泡均较模型组增多,PSD亦较模型组增厚。表明TP对Aβ1-40引起的海马突触超微结构的损伤有一定的改善作用。结论:TP可减轻AD模型大鼠海马突触结构受损的程度,促进PSD相关蛋白(NR2B,PSD-95)及其mRNA的表达,从而对突触的可塑性起到一定的保护作用。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-11
第1章 引言  11-14
第2章 材料和方法  14-21
  2.1 实验材料  14-16
    2.1.1 实验动物  14
    2.1.2 主要药品和试剂  14
    2.1.3 主要仪器设备  14-15
    2.1.4 主要实验溶液配制  15-16
  2.2 实验方法  16-21
    2.2.1 Aβ1－40 的孵育  16
    2.2.2 TP 的配制  16
    2.2.3 动物分组和模型的建立  16
    2.2.4 Morris 水迷宫检测  16-17
    2.2.5 甲苯胺蓝尼氏染色和免疫组织化学染色  17-18
    2.2.6 大鼠海马组织总RNA 的提取与鉴定  18-19
    2.2.7 逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR) 测定NR2B、PSD-95 mRNA 表达水平  19-20
    2.2.8 透射电镜切片制备与观察  20
    2.2.9 统计学分析  20-21
第3章 结果  21-25
  3.1 甲苯胺蓝尼氏染色  21
  3.2 免疫组织化学染色  21-22
  3.3 NR2B、PSD-95 mRNA 的表达  22-24
    3.3.1 RNA 质量鉴定结果  22-23
    3.3.2 NR2B、PSD-95 mRNA 相对含量  23-24
  3.4 透射电镜观察  24-25
第4章 讨论  25-31
  4.1 PSD 的结构和功能  25-26
  4.2 Aβ异常沉积引起突触结构改变  26-27
  4.3 Aβ异常沉积导致 PSD 中 NR2B 和 PSD-95 表达的改变  27-28
  4.4 TP 对Aβ引起的PSD 损伤的保护性作用  28-31
第5章 结论  31-32
致谢  32-33
参考文献  33-37
附录 实验照片  37-42
攻读学位期间的研究成果  42-43
附带综述  43-48

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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