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UPLC/MS/MS测定猪体内复方泰乐菌素—阿莫西林残留的研究

作　者: 王敏
导　师: 李艳华
学　校: 东北农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法猪复方泰乐菌素-阿莫西林残留
分类号: S859.84
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

酒石酸泰乐菌素-阿莫西林钠散剂是自行研制的防治猪链球菌病的复方药物,其中泰乐菌素是一种天然大环内酯类抗生素,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌都具有很高的杀灭作用。欧盟规定泰乐菌素在肉制品中的最高残留限量为0.1mg/kg,我国农业部于2002年规定了泰乐菌素在肉制品中的最高残留限量为0.2mg/kg。阿莫西林,又名羟氨苄青霉素,属于β-内酰胺抗生素,对金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌等几种常见的致病菌具有较强的抗菌活性,欧盟和我国农业部规定其在可食性组织中的最高残留限量均为0.05mg/kg。为了保证该复方药物在猪场的规范使用,保护人类的身体健康以及畜牧业的健康发展,故应建立残留监控体系并确定其休药期。本试验建立了猪可食性组织(心脏、肝脏、肺脏、肾脏、肌肉和脂肪)中酒石酸泰乐菌素的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱的测定方法。经乙腈脱脂脱蛋白,C18固相萃取柱净化,乙酸乙酯洗脱。超高效液相色谱-串联质谱测定,电喷雾正离子源进行离子化,多级反应监测方式对酒石酸泰乐菌素的母离子及其子离子进行监测;用全扫描方式对该物质进行了结构解析。本方法研究的酒石酸泰乐菌素的线性范围为5ng/mL～500ng/mL,线性相关系数0.9993～0.9996;在0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg的3个添加水平的回收率在72.6±4.14%～88.3±5.12%;相对标准偏差在4.5%～5.9%;各组织的日内变异系数在7.3%～10.1%,日间变异系数在7.2%～14%。方法检出限为5ng/g,定量限为15ng/g。本试验建立了猪组织中阿莫西林钠的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱的测定方法。经乙腈-水(15/2,v/v)溶液脱脂脱蛋白,HLB固相萃取柱净化,乙腈洗脱。超高效液相色谱-质谱测定。本方法研究的阿莫西林钠的线性范围为0.01μg/mL～1μg/mL,线性相关系数0.9992～0.9995;在0.025mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg的3个添加水平的回收率在65.9±3.49%～73.2±3.95%;相对标准偏差在5.1%～6.5%;各组织的日内变异系数在5.8%～7.8%,日间变异系数在5.1%～12.5%。方法检出限0.01μg/g,定量限为0.03μg/g。分析酒石酸泰乐菌素-阿莫西林钠散剂在猪可食性组织中的残留消除规律发现,休药12h,酒石酸泰乐菌素残留浓度在肝脏和肾脏的浓度最高,分别是0.27±0.03mg/kg和0.23±0.05mg/kg。休药36h,酒石酸泰乐菌素只有在肌肉和脂肪中的残留检不出,肝脏、肾脏、肺脏和心脏的残留浓度分别是0.11±0.03mg/kg、0.06±0.04 mg/kg、0.05±0.01 mg/kg和0.05±0.03 mg/kg,均低于欧盟规定的最高残留限量。休药12h,阿莫西林钠在肝脏和肾脏残留浓度最高,分别是0.20±0.05mg/kg、0.18±0.05mg/kg,依次为心脏、肺脏、肌肉和脂肪。休药60h,只有肝脏中检出阿莫西林钠,浓度是0.02±0.01mg/kg,低于其最高残留限量。根据实测浓度法,该复方药物在猪体内的休药期为60h。

全文目录

中文摘要  8-9
英文摘要  9-11
1 前言  11-25
  1.1 食品安全概述  11-12
  1.2 泰乐菌素概况  12-14
    1.2.1 泰乐菌素的理化性质  12-13
    1.2.2 泰乐菌素在动物体内的代谢  13
    1.2.3 泰乐菌素的毒副作用  13
    1.2.4 泰乐菌素的残留现状  13-14
  1.3 大环内酯类抗生素的样品前处理的方法  14-15
  1.4 大环内酯类抗生素的残留检测方法  15-17
    1.4.1 微生物测定法  15
    1.4.2 酶联免疫法  15
    1.4.3 仪器分析法  15-17
    1.4.4 其他方法  17
  1.5 阿莫西林概况  17-19
    1.5.1 阿莫西林的理化性质  17-18
    1.5.2 阿莫西林在动物体内的代谢  18
    1.5.3 阿莫西林的毒副作用  18-19
    1.5.4 阿莫西林的残留现状  19
  1.6 β-内酰胺抗生素样品前处理的方法  19-20
  1.7 β-内酰胺抗生素的残留检测方法  20-23
    1.7.1 微生物测定法  20
    1.7.2 免疫测定法  20-21
    1.7.3 仪器分析法  21-22
    1.7.4 其他方法  22-23
  1.8 超高效液相色谱技术和液相色谱/质谱技术简介  23-24
  1.9 本研究的目的与意义  24-25
2 材料与方法  25-31
  2.1 材料  25-26
    2.1.1 实验动物  25
    2.1.2 药品与试剂  25
    2.1.3 仪器设备  25-26
  2.2 方法  26-31
    2.2.1 试液配制  26
    2.2.2 给药与采样  26-27
    2.2.3 样品的处理  27
    2.2.4 检测条件  27-29
    2.2.5 方法学验证  29-30
    2.2.6 残留量的计算  30-31
3 结果与分析  31-42
  3.1 质谱检测  31-32
    3.1.1 酒石酸泰乐菌素的质谱图  31
    3.1.2 阿莫西林的质谱图  31-32
  3.2 色谱行为  32-33
  3.3 标准曲线和线性范围  33-35
    3.3.1 酒石酸泰乐菌素的标准曲线和线性范围  33-34
    3.3.2 阿莫西林的标准曲线和线性范围  34-35
  3.4 准确度  35-37
    3.4.1 酒石酸泰乐菌素的准确度  35-36
    3.4.2 阿莫西林的准确度  36-37
  3.5 精密度  37-39
    3.5.1 酒石酸泰乐菌素的精密度  37-38
    3.5.2 阿莫西林的精密度  38-39
  3.6 最低检测限和最低定量限  39
  3.7 猪组织中复方泰乐菌素-阿莫西林的消除规律  39-42
    3.7.1 猪组织中酒石酸泰乐菌素的消除规律  39-41
    3.7.2 猪组织中阿莫西林钠的消除规律  41-42
4 讨论  42-47
  4.1 取样  42
  4.2 质谱条件的优化  42
  4.3 流动相的选择  42-43
  4.4 样品前处理  43-44
    4.4.1 酒石酸泰乐菌素的样品前处理  43
    4.4.2 阿莫西林的样品前处理  43-44
  4.5 消除规律  44-47
结论  47-48
致谢  48-49
参考文献  49-55
附录  55-63
攻读硕士学位期间发表的论文  63

UPLC/MS/MS测定猪体内复方泰乐菌素—阿莫西林残留的研究

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