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Corallococcus coralloides 085B04次级代谢产物的分离与结构表征

作　者: 鞠培殿
导　师: 刘新利
学　校: 山东轻工业学院
专　业: 发酵工程
关键词: 粘细菌珊瑚球菌次级代谢产物抗肿瘤结构鉴定
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 42次
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内容摘要

粘细菌是一种革兰氏阴性、单细胞、杆状细菌,有独特的形态分化过程和社会性行为,因其能够产生广谱次级代谢产物而被人们所熟知,已经成为继放线菌、芽孢杆菌之后的第三大药源菌。本文对粘细菌菌株Corallococcus coralloides 085B04的生物学特性及其次级代谢产物进行了研究。通过显微观察和发酵培养等方法,掌握了粘细菌的生长习性及生活史,获得了粘细菌发酵液的乙酸乙酯萃取物。使用高效液相色谱法对乙酸乙酯萃取的粗产物和培养基的乙酸乙酯萃取物进行对比,通过分析发现,粗产物的色谱峰比VY-2培养基多12个。将发酵液粗提物通过硅胶色谱(石油醚/丙酮)梯度洗脱分离后,多次使用硅胶色谱、凝胶色谱和HPLC等技术对各组分进行分离纯化,最终从中分离得到粘细菌次级代谢产物19个。通过1H-NMR,13C-NMR、二维核磁数据、质谱、红外和紫外数据分析,对分离到的化合物进行了结构确证,其中化合物2、15和19是新化合物,它们分别是1-(1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-4-yl)ethanone ,5-(hydroxyimino)-1,3- dimethyl-1H-pyrrol-2(5H)-one和8-(色原烷-4’-甲酰)-环(S-脯氨酸-R-亮氨酸)。通过MTT法对得到的部分化合物作了抗肿瘤活性分析,得到了1个对前列腺癌细胞(PC3)和Hela YFP细胞抗性较好的化合物16,其IC50分别为7.8μg/mL和10.3μg/mL;1个对乳腺癌细胞(MCF-7)细胞抗性较好的化合物18,其IC50为13.7μg/mL。其中某些化合物,可能对其它肿瘤细胞具有很好的抗性,但需要进一步的研究。

全文目录

摘要  9-11
ABSTRACT  11-13
第1章绪论  13-23
  1.1 粘细菌的生物学特性  13-14
  1.2 粘细菌产生的次级代谢产物特性  14-20
    1.2.1 粘球菌次级代谢产物的多样性  14-15
    1.2.2 粘球菌次级代谢产物的主要生物活性  15-19
      1.2.2.1 呼吸链抑制类  15-16
      1.2.2.2 抑制蛋白质合成类  16
      1.2.2.3 蛋白质磷酸化系统抑制剂  16-17
      1.2.2.4 核酸合成抑制类  17-18
      1.2.2.5 细胞壁合成抑制剂  18-19
    1.2.3 其他  19-20
  1.3 本课题的立题依据、目的和研究意义  20
  1.4 本课题的研究内容  20-23
第2章菌株生物学特征及鉴定  23-31
  2.1 实验材料  23
    2.1.1 仪器  23
    2.1.2 培养基  23
    2.1.3 菌株  23
  2.2 实验方法  23-25
    2.2.1 粘细菌的培养观察  23-24
    2.2.2 粘细菌的分子生物学鉴定  24-25
      2.2.2.1 提取基因组DNA  24-25
      2.2.2.2 PCR 扩增16s rDNA  25
      2.2.2.3 连接  25
      2.2.2.4 转化  25
      2.2.2.5 序列分析及分子进化树的构建  25
  2.3 结果与讨论  25-31
    2.3.1 菌株形态学观察  25-27
    2.3.2 分子生物学鉴定结果  27-29
      2.3.2.1 琼脂糖凝胶电泳  27-28
      2.3.2.2 16s rDNA 测序结果  28-29
    2.3.3 讨论  29-31
第3章珊瑚球菌发酵及次级代谢产物分离纯化  31-53
  3.1 实验材料  31-33
    3.1.1 菌株  31
    3.1.2 培养基  31
    3.1.3 试剂  31-32
    3.1.4 仪器  32-33
    3.1.5 层析系统和显色剂  33
  3.2 试验方法  33-46
    3.2.1 珊瑚球菌发酵及次级代谢产物粗提物的获得  33
    3.2.2 次级代谢产物的确认以及与培养基成分的对比  33
    3.2.3 次级代谢产物的分离  33-46
      3.2.3.1 硅胶柱层析粗分离  34
      3.2.3.2 各组分化合物的纯化  34-46
  3.3 结果与讨论  46-53
    3.3.1 发酵及粗产物提取  46-47
    3.3.2 次级代谢产物的确认以及与培养基成分的对比  47-49
    3.3.3 次级代谢产物的分离和纯化  49-51
    3.3.4 讨论  51-53
第4章结构鉴定  53-65
  4.1 实验仪器  53
  4.2 实验方法  53
  4.3 化合物结构解析  53-63
    4.3.1 化合物1 的结构鉴定  53-54
    4.3.2 化合物2 结构鉴定  54
    4.3.3 化合物3 的结构鉴定  54-55
    4.3.4 化合物4 的结构鉴定  55-56
    4.3.5 化合物5 结构鉴定  56
    4.3.6 化合物6 结构鉴定  56
    4.3.7 化合物7 结构鉴定  56-57
    4.3.8 化合物8 的结构鉴定  57
    4.3.9 化合物9 的结构鉴定  57-58
    4.3.10 化合物10 的结构鉴定  58
    4.3.11 化合物11 的结构鉴定  58
    4.3.12 化合物12 的结构鉴定  58
    4.3.13 化合物13 的结构鉴定  58-59
    4.3.14 化合物14 的结构鉴定  59-60
    4.3.15 化合物15 的结构鉴定  60
    4.3.16 化合物16 的结构鉴定  60-61
    4.3.17 化合物17 的结构鉴定  61
    4.3.18 化合物18 的结构解析  61-62
    4.3.19 化合物19 的结构解析  62-63
  4.4 结果与讨论  63-65
    4.4.1 洗脱顺序与化合物之间的关系  63
    4.4.2 化合物结构和来源之间的关系  63-65
第5章 MTT 法测定次级代谢产物的抗肿瘤活性  65-71
  5.1 实验材料  65-66
    5.1.1 实验仪器  65
    5.1.2 实验细胞株  65
    5.1.3 试剂  65-66
  5.2 实验方法  66-67
    5.2.1 孵化细胞  66
    5.2.2 药物准备  66
    5.2.3 铺板  66
    5.2.4 加药  66
    5.2.5 OD 值测定及IC50 的计算  66-67
  5.3 试验结果  67-71
    5.3.1 珊瑚球菌次级代谢产物粗提物的抗癌活性筛选  67
    5.3.2 珊瑚球菌次级代谢产物抗癌活性筛选  67-68
    5.3.3 讨论  68-71
参考文献  71-77
致谢  77-79
附录  79-111
在学期间主要科研成果  111
  一、发表学术论文  111
  二、其它科研成果  111

Corallococcus coralloides 085B04次级代谢产物的分离与结构表征

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