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转录因子FoxA1促进干细胞神经分化的研究

作　者: 丁妙
导　师: 谭拥军
学　校: 湖南大学
专　业: 生物医学工程
关键词: P19胚胎癌细胞 维甲酸诱导 FoxA1 神经分化
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


FoxA1(又名HNF-3α)是Fox翼状螺旋转录因子家族成员之一。在发育的神经管以及成体的脑组织中FoxA1的表达模式表明其在神经形成起到了重要作用。为了进一步阐明转录因子FoxA1诱导多能性干细胞分化的基因调控机理,本文主要探索干细胞神经细胞分化过程中,转录因子FoxA1对Nestin基因表达的调节作用。我们采用小鼠胚胎癌细胞-维甲酸诱导分化的细胞模型,发现分化发生的最早期,FoxA1表达上调,随后神经发育基因Nestin的表达随神经干细胞的分化上调,推测Nestin可能受FoxA1的直接调控。为此,我们对神经发育过程中FoxA1对Nestin的表达调节作进一步的研究。采用高表达FoxA1转录因子和干扰FoxA1转录因子两种手段来考察Nestin的表达对应关系。进一步采用染色质免疫共沉淀的方法分析FoxA1的表达水平与FoxA1蛋白是否能够能源性结合到Nestin的启动子区域。构建了Nestin的启动子介导的报告基因质粒,通过共转染实验考察FoxA1对Nestin启动子的转录刺激作用。转录因子FoxA1在胚胎发育时期扮演了重要的角色,该因子在维甲酸诱导多能性畸胎癌细胞神经分化早期被激活,同时增加Nestin的表达水平。在多能性畸胎癌P19干细胞内单独过表达FoxA1可以刺激Nestin的表达。同时,当在P19细胞神经分化过程中抑制FoxA1的表达时,导致Nestin的表达阻断。FoxA1通过结合到Nestin的-4179至-3919bp的启动子区域启动该基因的表达。在P19细胞内通过腺病毒介导的高表达Foxa1实验,证明Nestin的表达与FoxA1存在相关性。在维甲酸诱导P19细胞神经过程中,增加FoxA1的表达水平可以增加神经元样细胞的数量。总之,本研究证明FoxA1在促进多能性干细胞的神经分化早期,起到了重要的作用。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-7
英文缩写  7-10
第1章 绪论  10-17
  1.1 转录因子参与基因转录调控的研究  10-11
  1.2 干细胞神经分化简介  11-13
    1.2.1 干细胞的背景知识  11-12
    1.2.2 干细胞的神经发生  12
    1.2.3 P19细胞是多能性干细胞  12-13
  1.3 FoxA1转录因子简介  13-14
  1.4 神经巢蛋白(NESTIN)  14-15
  1.5 本文构思  15-17
第2章 腺病毒介导的FOXA1高表达体系  17-28
  2.1 前言  17-18
  2.2 实验材料  18-19
  2.3 实验方法  19-23
    2.3.1 病毒构建  19
    2.3.2 腺病毒的扩增及纯化  19-23
    2.3.3 病毒感染  23
  2.4 实验结果  23-26
    2.4.1 腺病毒构建及鉴定  23-24
    2.4.2 腺病毒的扩增、纯化和滴度测定  24-25
    2.4.3 病毒感染及结果  25-26
  2.5 讨论  26-28
第3章 FOXA1调节NESTIN的转录研究  28-52
  3.1 前言  28-29
  3.2 实验材料  29-30
  3.3 实验方法  30-44
    3.3.1 RA诱导、高表达FoxA1以及干扰FoxA1三种细胞体系的建立  30-35
    3.3.2 染色质免疫共沉降实验  35-38
    3.3.3 Nestin基因启动子克隆  38-44
  3.4 实验结果  44-50
    3.4.1 FoxA1与Nestin的表达存在相关性  44-47
    3.4.2 Nestin的启动子区域存在Foxal结合位点  47-48
    3.4.3 FoxA1能调节Nestin的启动子  48-50
  3.5 讨论  50-51
  3.6 小结  51-52
第4章 FOXM1内源性的结合到OCT4的启动子区域  52-56
  4.1 前言  52-53
  4.2 实验材料  53
  4.3 实验方法  53-54
  4.4 实验结果  54
  4.5 讨论  54-55
  4.6 小结  55-56
总结及展望  56-57
参考文献  57-66
附录A 攻读硕士学位期间发表的论文目录  66-67
附录B 常用缓冲液和试剂配方  67-69
致谢  69

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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