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聚乳酸—壳聚糖纤维/羟基磷灰石—硅酸钙复合支架材料的细胞相容性研究

作　者: 魏丽
导　师: 李德超
学　校: 佳木斯大学
专　业: 口腔基础医学
关键词: 复合支架细胞相容性生物材料成骨细胞骨组织工程
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:为开展骨组织工程研究,采用改良胶原酶消化法从新生Wistar大鼠的颅盖骨分离和体外培养成骨细胞。观察其生物学特性,并与聚乳酸(polylactic acid,PLA )-壳聚糖纤维(chitosan fiber ,CF)/羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA )-硅酸钙(calcium silicate,CS)复合支架材料体外复合培养,观察复合支架材料PLA-CF/HA-CS对成骨细胞粘附、增殖、分化的影响。为骨组织工程支架材料的临床应用提供依据。方法:取新生24h内Wistar大鼠的颅盖骨,采用改良胶原酶消化法进行成骨细胞原代培养。7天后对成骨细胞采用“差速贴附法”进行纯化,并将纯化后的成骨细胞进行传代培养。通过倒置相差显微镜观察、苏木精-伊红染色、碱性磷酸酶(alkaline phosphorase,ALP)染色、钙结节茜素红染色对获得的细胞进行生物学特性的观察与鉴定。然后将第四代细胞与聚乳酸/壳聚糖纤维(PLA-CF)、聚乳酸-壳聚糖纤维/硅酸钙(PLA-CF/CS)、聚乳酸-壳聚糖纤维/羟基磷灰石-硅酸钙(PLA-CF/HA-CS)三种复合支架材料体外复合培养。培养3,6,9天后,用倒置相差显微镜观察材料周边的细胞形态,通过ALP活性测定法和MTT法观察三种支架材料对细胞分化、增殖的影响。结果:1、.形态学观察:经鼠颅盖骨培养出的成骨细胞符合成骨细胞形态和生长特性,呈短梭形、三角形和多角形。2、组织学观察:培养的细胞通过碱性磷酸酶染色,镜下见细胞质中细胞核周围有大量蓝紫色颗粒,结果呈阳性;通过茜素红染色,可观察到钙结节形成,符合成骨细胞生物学特性鉴定标准。3、材料与细胞联合培养情况观察:复合培养第9天可以看到细胞有明显地向材料聚集的生长趋势,三种材料中以PLA-CF/HA-CS支架附着细胞密度增加相对明显,且向材料聚集生长的趋势更明显。4、通过MTT比色法表明各实验组间相比,差异有显著性意义(P < 0.05);组内各时间点间比较,差异有显著性意义(P < 0.05)。ALP活性测定法表明三种支架材料对成骨细胞分泌碱性磷酸酶均有促进作用,与对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05);各组之间两两比较,差异有显著性意义(P < 0.05)。结论:1、经Wistar大鼠颅盖骨培养出的成骨细胞,符合成骨细胞形态和生物学特性鉴定标准。2、三种支架材料均有利于成骨细胞的粘附、生长、分化、增殖,而PLA-CF/HA-CS复合支架材料较PLA-CF和PLA-CF/CS支架材料促进成骨细胞的分化、增殖效果更好,证实其细胞相容性好,可以作为一种良好的骨组织工程支架材料。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
文献综述  11-22
材料和方法  22-29
结果  29-33
讨论  33-38
结论  38-39
参考文献  39-44
致谢  44-45
英文缩写  45-46
附图  46-53
攻读学位期间发表的学术论文  53

聚乳酸—壳聚糖纤维/羟基磷灰石—硅酸钙复合支架材料的细胞相容性研究

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