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核盘菌菌核围微生物的分离以及拮抗性分析

作　者: 卢叶青
导　师: 李国庆
学　校: 华中农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 核盘菌菌核围盾壳霉拮抗性生物防治
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

核盘菌的生活史中有90%的时间是以菌核形式存在于土壤中,因此土壤环境对核盘菌有着重要的影响。土壤当中存在着丰富的微生物群落,尤其是土壤中的菌核重寄生菌,对于核盘菌菌核在土壤中的存活状态有着重要的意义。定义土壤中核盘菌菌核的表皮层为菌核围,菌核围微生物存在何种微生物类群,这些微生物与核盘菌之间是否具有拮抗作用,对于核盘菌菌核的存活状态具有决定性的作用。盾壳霉的田间施用后也以孢子形式长期存活于土壤当中,自然生境亦为土壤。因此,盾壳霉寄生核盘菌菌核的效果直接受到菌核围其它微生物的影响。探索核盘菌菌核围真菌和细菌对盾壳霉寄生核盘菌菌核的影响,对于利用盾壳霉进行菌核病防治具有重要的理论价值。首先分离获得菌核围真菌和细菌。二者的种群数量明显高于非菌核围土壤的真菌和细菌数量。将菌核围的种群数量值除以非菌核围得到比值W。将W值定义为菌核围效应值。计算结果表明：W值范围是1.43-249.59。接着通过平板对峙培养试验,测定菌核围细菌和真菌分离物与核盘菌和盾壳霉之间的拮抗作用。结果表明：33个真菌分离物中,10个分离物(编号：A1、B、C2、D0、E、E0、E1、F、F1和SDD)对核盘菌具有拮抗作用。66个细菌分离物中,7个分离物(编号为a1、e2、h、fl、x-a-和x-f)对核盘菌具有拮抗作用。结果还表明：这些真菌和细菌分离物对盾壳霉也有不同程度的拮抗作用。还分析了上述拮抗性真菌和拮抗性细菌分离物对盾壳霉寄生核盘菌菌核的影响。结果表明：真菌菌株A1、C2、D0、E0、F、F1和SDD,细菌菌株a0、e1、e2、h、f1、x-a和x-f能够降低盾壳霉的寄生致腐核盘菌菌核。结果还发现细菌菌株ao可以单独寄生致腐核盘菌菌核。离体叶片试验表明：上述拮抗菌株对核盘菌侵染油菜叶片都具有不同程度的抑制效果。菌株A1、B、SDD、a0、h、el和e2等与盾壳霉混合后能够显著抑制核盘菌对油菜叶片的侵染。最后对上述拮抗菌株进行了形态学和分子生物学鉴定。结果表明：菌株A1和B为青霉属(Penicillium spp.),菌株C2、Fl和SDD为镰刀菌属(Fusarium spp.),菌株D0、Eo和F为木霉属(Trichoderma spp.),菌株E和E1为曲霉属(Aspergillusspp.),菌株a0和h为类芽孢杆菌属(Paenibacillus spp.),菌株e1、e2和f1为芽孢杆菌属(Bacillus subtilis.),菌株x-a和x-f为假单胞菌属(Pseudomonas spp.)上述研究结果表明：核盘菌菌核围微生物对盾壳霉寄生核盘菌菌核有影响。这可能是影响盾壳霉生防效果不稳定的原因之一。

全文目录

摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
第一章文献综述  11-18
  1. 核盘菌的研究进展  11-13
    1.1 核盘菌的寄主范围及危害  11
    1.2 核盘菌的生物学特性  11-12
    1.3 作物菌核病的防治  12-13
  2 盾壳霉的研究进展  13-14
    2.1 盾壳霉的生物学特性  13
    2.2 盾壳霉的生态学特性  13-14
    2.3 盾壳霉对核盘菌的寄生作用  14
  3 盾壳霉寄生核盘菌菌核的土壤生境  14-16
    3.1 土壤中已经分离到的菌核寄生菌  15
    3.2 核盘菌土壤生防菌生防机制和效果的探索  15-16
  4 研究的目的和研究内容  16-18
    4.1 研究目的  16
    4.2 研究内容  16-18
第二章土壤微生物和菌核微生物的分离  18-23
  1 材料和方法  18-20
    1.1 核盘菌菌核培养  18
    1.2 土样准备  18
    1.3 菌核微生物形成培养  18-19
    1.4 真菌和细菌的分离  19-20
      1.4.1 培养基  19
      1.4.2 菌核围土壤以及非菌核围土壤样品制备  19
      1.4.3 菌核围真菌和细菌的分离  19-20
    1.5 数据统计分析  20
  2 结果与分析  20-21
    2.1 菌核围真菌系和细菌系的分离  20-21
  3 讨论  21-23
第三章菌核围真菌及细菌分离物对核盘菌的拮抗性测定  23-29
  1 材料和方法  23-24
    1.1 真菌和细菌的活化和培养  23
    1.2 平板对峙培养试验  23-24
  2 结果与分析  24-27
    2.1 拮抗真菌和拮抗细菌的筛选  24-27
    2.2 拮抗菌对核盘菌菌核形成的影响  27
  3 讨论  27-29
第四章菌核围真菌和细菌分离物对盾壳霉的拮抗性测定  29-32
  1. 材料和方法  29-30
    1.1 试验材料  29
    1.2 菌核围真菌和细菌的活化  29
    1.3 菌核围微生物与盾壳霉的拮抗测定  29
    1.4 盾壳霉对供试菌核围细菌的拮抗作用测定  29-30
  2 结果与分析  30-31
    1.1 真菌分离物对盾壳霉菌丝生长的抑制作用  30
    1.2 细菌分离物对盾壳霉菌丝生长的抑制作用  30-31
  3 讨论  31-32
第五章菌核围真菌和细菌分离物的鉴定  32-55
  1. 材料和方法  32-38
    1.1 材料  32-33
      1.1.1 供试菌株  32
      1.1.2 供试培养基  32
      1.1.3 染色试剂及配制  32-33
      1.1.4 PCR扩增的相关试剂  33
      1.1.5 基因组DNA提取相关试剂及配制  33
    1.2 方法  33-38
      1.2.1 待测真菌菌株的培养方法  33
      1.2.2 拮抗真菌形态特征观察鉴定  33
      1.2.3 待测拮抗细菌菌株的培养方法  33-34
      1.2.4 拮抗细菌形态特征观察  34
      1.2.5 真菌的分子鉴定  34-37
      1.2.6 细菌的分子鉴定  37-38
  2 结果与分析  38-54
    2.1 真菌鉴定结果  39-46
      2.1.1 真菌形态特征  39-41
      2.1.2 真菌PCR产物琼脂糖凝胶电泳  41
      2.1.3 真菌菌株BLAST同源性搜索比较  41-46
    2.2 细菌鉴定结果  46-54
      2.2.1 细菌形态特征  46-49
      2.2.2 细菌PCR产物琼脂糖凝胶电泳  49-50
      2.2.3 细菌BLAST同源性搜索比较  50-54
  3 小结  54-55
第六章拮抗菌与盾壳霉混合的生防效力测定  55-62
  1 材料与方法  55-57
    1.1 材料  55
      1.1.1 供试菌株  55
      1.1.2 供试菌株的培养  55
      1.1.3 菌核的培养  55
    1.2 盾壳霉对核盘菌菌核的寄生致腐作用测定  55-56
    1.3 接抗菌混合盾壳霉离体叶片实验  56
    1.4 数据统计分析  56-57
  2 结果与分析  57-60
    2.1 盾壳霉混合拮抗菌寄生菌核实验  57-59
    2.2 盾壳霉混合拮抗菌离体叶片试验  59-60
  3. 讨论  60-62
参考文献  62-72
致谢  72

核盘菌菌核围微生物的分离以及拮抗性分析

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