|
超氧化物歧化酶(EC,1.15.1.1)是种广泛存在于动植物及微生物中的金属酶,其为专一清除超氧阴离子自由基(02·-)的酶,进而防止氧自由基对机体细胞的组成、结构和功能的破坏,从而保护细胞免受氧化损伤。类SOD是一类具有类似SOD生物活性的天然化合物,在植物中含量和种类都很丰富。串叶松香草是一种牧草,原生长于美国,上世纪七十年代由北京植物园引进,中国农业科学院试种成功,之后在全国多地区开始试种。串叶松香草引进国内后,主要应用是作为沙漠植物,用以防风固沙,因此国内大多数对于串叶松香草的研究都集中于其种植方面,但基于国外对串叶松香草的营养价值的研究,近几年国内对于串叶松香草其他方面的应用也有研究,较多的是作为牧草对其饲喂的适口性等研究。但是,其实串叶松香草中有很丰富的叶蛋白,而对于其这方面的研究和开发国内鲜有报道,因此为了对串叶松香草SOD和类SOD进行开发,增大其商业应用价值,我们对串叶松香草中类SOD进行了应用研究,以期对其应用开发做出一点贡献。采用单因素实验方法,我们得到以水为溶剂提取串叶松香草中SOD和类SOD化合物的条件,即在pH 7.0,料液比1：7.5,提取温度30℃水浴,浸提12h的条件下,串叶松香草水提液的活性最高,可达到31.05U/ml,换算为干物料的活性值为232.91U/g。对串叶松香草水提液同时进行了类SOD活性物质的含量测定。采用标准曲线法,分别选取黄酮类化合物、多酚类化合物和维生素C三种进行含量测定,根据实验测定三类物质在串叶松香草水提液中的含量分别为黄酮化合物7.9mg/g,多酚化合物3.84mg/g,维生素C 1.26mg/g。同时,对提取液的抗氧化能力进行了初步测定,选取其对羟自由基·OH和DPPH自由基的清除能力测定,以抗坏血酸和芦丁为阳性对照,发现串叶松香草水提液对羟自由基-OH有较强的清除能力,且比同浓度下的抗坏血酸和芦丁清除率稍高,并且水提液对DPPH·自由基也有较强的清除能力,与抗坏血酸的清除效果相当。利用串叶松香草水提取后的残渣,以乙醇为溶剂,对其进行黄酮类化合物的提取。实验使用超声波辅助提取的方法,采用控制单一实验因素得到提取黄酮类化合物的最佳实验条件为：乙醇溶液浓度90%,固液化比例控制在1：15,超声波功率为80%,超声提取温度为60℃,超声波作用时间为1.5小时。按上述条件进行黄酮化合物的提取,最高可得到提取率为7.48mg/g的提取液。通过大孔树脂静态吸附和解吸率,以及动态吸附实验,我们从大孔树脂Hz 816和Hz 818两种树脂中筛选出,Hz 818树脂更适合串叶松香草黄酮提取液的分离纯化,并利用硅胶板薄层层析发现串叶松香草的黄酮提取液中含有六种主要成分。以Hz 818树脂为介质,对黄酮溶液进行了初步的分离,上样后,先以两倍去离子水进行洗脱后,可将黄酮成分1洗脱下来,以一倍体积的60%乙醇溶液可将黄酮成分2洗脱下来,而黄酮成分3、4、5和6依靠大孔树脂乙醇梯度洗脱无法得到很好的分离效果,需要借助其他分离方法进行分离。
|