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中草药对紫外线照射下真皮成纤维细胞保护作用的研究

作　者: 任捷
导　师: 项蕾红；严淑贤
学　校: 复旦大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 紫外线皮肤衰老真皮成纤维细胞中草药杜仲
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的研究紫外线(UV)照射对真皮成纤维细胞功能的影响,筛选出对这些改变有保护作用的中草药,确定合适的作用浓度。方法以体外培养人真皮成纤维细胞为研究对象,首先研究长波紫外线(UVA1,340-400nm)和中波紫外线(UVB,280-320nm)照射对细胞增殖率(CCK-8法测定)的影响。细胞接受一定剂量UVA1或UVB照射同时加入不同浓度杜仲、绞股蓝、雪莲、黄芪、雪茶提取液,观察药物对UV照射下细胞增殖抑制的保护作用,筛选出有保护作用的中草药并摸索合适的作用浓度。此后,研究UVA1和UVB照射对真皮成纤维细胞功能的影响,以实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法测定基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-3mRNA水平,以酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白表达水平,并研究第一步筛选出的药物杜仲对UV照射下细胞功能改变的保护作用。结果UVA1或UVB照射可以抑制人真皮成纤维细胞的增殖,与未照射组相比,20J/cm2UVA1和40mJ/cm2UVB照射组即有显著性差异(P<0.01),随着照射剂量增加,细胞增殖率逐步下降,两者呈显著相关性(P<0.01)。20J/cm2UVA1或40mJ/cm2UVB照射时,MMP-1和MMP-3mRNA水平显著增加(P<0.01),Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。细胞接受20J/cm2UVA1或40mJ/cm2UVB照射同时分别加入不同浓度杜仲、绞股蓝、雪莲、黄芪、雪茶提取液,杜仲提取液(0.1,1mg/ml)可以显著减少UVA1和UVB照射对细胞增殖的抑制作用(P<0.01),绞股蓝提取液(1,10mg/ml)可以显著减少UVA1照射对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)和UVB照射对细胞增殖的抑制作用(P<0.05),雪莲提取液仅减少UVA1对细胞增殖的抑制作用(0.1mg/ml, P<0.05; 1mg/ml, P<0.01),但并未改善UVB照射对细胞增殖抑制的影响作用(P>0.05),黄芪和雪茶提取液对UVA1和UVB照射下细胞增殖的抑制作用均无显著保护作用(P>0.05)。杜仲提取液可以抑制MMP-1和MMP-3mRNA水平,其中1 mg/ml作用最强(P<0.01),同时还可以改善UV照射对Ⅰ型前胶原蛋白(P<0.01)和Ⅲ型前胶原蛋白表达水平的抑制作用(P<0.05)。结论UV照射可抑制成纤维细胞增殖；加速真皮细胞外基质成分(ECM)的降解；抑制胶原纤维的合成代谢。在体外,UVA1要产生与UVB同等的抗细胞增殖作用,剂量约为UVB的500倍。杜仲提取液对UV产生的上述各种损伤具有保护作用,因而对防治皮肤光老化可能有一定作用。适当浓度的绞股蓝、雪莲提取液亦可以不同程度改善UVA1和/或UVB照射对细胞增殖的抑制作用。

中草药对紫外线照射下真皮成纤维细胞保护作用的研究

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