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氯沙坦对自发性高血压大鼠肾小管钠/氢交换蛋白3表达的影响及其肾脏保护作用

作　者: 范小琴
导　师: 高原
学　校: 遵义医学院
专　业: 生理学
关键词: 氯沙坦自发性高血压大鼠 SGK1蛋白 NHE3蛋白氧化应激肾功能
分类号: R544.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

第一部分氯沙坦对自发性高血压大鼠肾小管钠/氢交换蛋白3亚型表达的影响目的：观察氯沙坦对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rat, SHR)肾小管钠/氢交换蛋白3亚型(Sodium hydrogen exchanger isform 3, NHE3)的表达的影响,并探讨血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(Serum and glucocorticoid inducible kinase 1, SGK1)的表达变化,同时观察氯沙坦在影响SHR肾小管NHE3表达的过程中,是否与SGK1的表达变化有关,为深入认识氯沙坦抗高血压的药效学机制提供新的依据,并为研发新型的抗高血压药提供新的作用靶点。方法：自发性高血压大鼠12只,随机分为氯沙坦灌胃组(Los组)及溶媒灌胃组(SHR组)各组6只；Wistar Kyoto大鼠(WKY组)6只为空白对照组。Los组按每只大鼠30mg/kg/day灌胃,WKY组及溶媒SHR组每日灌胃体积的溶媒。根据大鼠体重,每周调整药物剂量一次；连续灌胃至18周龄。每两周以尾套法测量大鼠收缩压。收集血浆及肾脏,放免法测定各组大鼠血浆和肾组织中血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, Angll)水平；实时荧光定量PCR检测各组大鼠肾小管SGK1、NHE3 mRNA表达的变化；免疫组织化学过氧化物酶连接法及图像分析方法测定肾内NHE3蛋白的定位和表达。结果：1、SHR组收缩压高于WKY组(P<0.01),Los组从10w开始氯沙坦连续灌胃2w后,其收缩压显著低于SHR组(P<0.05),在此后连续氯沙坦灌胃的6w时间里,收缩压平稳下降(P<0.01)；2、在连续灌胃8w后,Los组血浆AngⅡ水平显著高于WKY组(P<0.05),而与SHR组无显著性差异(P>0.05)；Los组肾组织的AngⅡ水平也显著高于WKY组(P<0.05),与SHR组比较,也无显著性差异(P>0.05)；3、实时荧光定量PCR检测结果显示相对于正常WKY组,SHR组肾小管的NHE3mRNA表达量增加了2.3倍,而Los组的仅增加了1.65倍；4、免疫组织化学染色结果显示：相对于WKY组,溶媒SHR组NHE3蛋白在肾小管上皮细胞呈明显强阳性,蛋白表达量最高,灰度值评分最低;Los组NHE3蛋白在肾小管上皮细胞呈中度强阳性,蛋白表达量有所增加。5、与WKY组相比,SHR组肾小管的SGK1mRNA表达量增加3.31倍,而Los组的仅增加了1.84倍。结论：1、自发性高血压大鼠血浆和肾组织RAS普遍激活,氯沙坦不能抑制RAS的激活。2、自发性高血压大鼠肾小管NHE3mRNA和蛋白均有异常的过度表达,AT1受体的激活是此过度表达的原因之一。3、自发性高血压大鼠肾脏SGK1mRNA经AT1受体介导也有异常的过度表达,这可能是导致NHE3过度表达的一个中间环节。4、氯沙坦对高血压病的药效动力学机制可能涉及这种AT1受体的非肽类拮抗剂对肾小管SGKl和NHE3过度表达的限制。5、氯沙坦对自发性高血压大鼠肾小管SGK1和NHE3过度表达的限制,与其降压疗效具有时间上的一致性。第二部分氯沙坦对自发性高血压大鼠氧化应激及肾功能的影响目的：观察氯沙坦对自发性高血压大鼠氧化应激及肾功能的影响,探讨氯沙坦对高血压肾损害的保护机制。方法：自发性高血压大鼠12只,随机分为氯沙坦灌胃组(Los组)及溶媒灌胃组(SHR组)各组6只；Wistar Kyoto大鼠(WKY组)6只为空白对照组。Los组按每只大鼠30mg/kg/day灌胃,WKY组及溶媒SHR组每日灌胃体积的溶媒。根据大鼠体重,每周调整药物剂量一次；连续灌胃至18周龄。收集尿、血清及肾。肾组织HE染色观察其形态学变化；放射免疫分析法(radioimmunoassay, RIA)测定尿β2-微球蛋白(β2-micro globulin,β2-MG)的含量；比色法测定血清中血肌酐(Serum creatinine, SCr)、血尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN),血清和肾组织一氧化氮(Nitric oxide, NO)、超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(Maleic dialdehyde, MDA)水平。结果：1.与18周龄WKY组比较,溶媒灌胃SHR组大鼠血清及肾组织NO、SOD水平均显著降低(P<0.01；P<0.01),但MDA水平显著升高(P<0.01)；Los组在氯沙坦连续灌药8w后,血清及肾组织中NO、SOD水平较SHR组显著升高(P<0.05；P<0.05),而MDA的含量则明显降低(P<0.05)；2.与18周龄的WKY组比较,溶媒灌胃SHR大鼠血清SCr水平略有升高但无显著性差异(P>0.05)；血清BUN及尿β2-微球蛋白明显增加(P<0.05;P<0.01),Los组在氯沙坦连续灌胃8w后,血清BUN及尿β2-微球蛋白明显降低(P<0.05；P<0.01)。结论：1.氧化应激可能参与了高血压肾损害的发病机制；2.氯沙坦对自发性高血压肾损害有一定的保护作用；3.氯沙坦对自发性高血压肾病的保护可能部分通过改善氧化应激作用实现。

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英汉缩略词对照表  6-7
前言  7-8
1 氯沙坦对自发性高血压大鼠肾小管钠/氢交换蛋白3表达的影响  8-33
  1.1 中文摘要  8-10
  1.2 英文摘要  10-12
  1.3 引言  12-14
  1.4 材料与方法  14-22
  1.5 结果  22-29
  1.6 讨论  29-32
  1.7 结论  32-33
2 氯沙坦对自发性高血压大鼠氧化应激及肾功能的影响  33-48
  2.1 中文摘要  33-34
  2.2 英文摘要  34-36
  2.3 引言  36-38
  2.4 材料与方法  38-42
  2.5 结果  42-44
  2.6 讨论  44-47
  2.7 结论  47-48
3 参考文献  48-51
4 钠/氢交换蛋白3亚型的研究进展(综述)  51-59
5 致谢  59-60
作者简介  60

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