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毒素基因exoS，exoU在铜绿假单胞菌临床株中的携带情况及对肺炎预后的影响

作　者: 董晨晓
导　师: 宋诗铎
学　校: 天津医科大学
专　业: 内科学
关键词: 铜绿假单胞菌 Ⅲ型分泌系统毒素基因阿奇霉素赖氨匹林
分类号: R563.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

研究目的：铜绿假单胞菌是临床上重要的革兰阴性条件致病菌,是院内感染主要的致病菌,重症感染患者病死率相对较高,已成为临床治疗的一大难题。Ⅲ型分泌系统的发现是近年来细菌致病机制研究的重要进展,本课题通过研究铜绿假单胞菌临床株的Ⅲ型分泌系统毒素基因exoS,exoU的携带情况与耐药性的关系,以及其与肺炎患者预后的关系,将加深对细菌致病性的理解,拓宽抗感染途径,通过阿奇霉素和赖氨匹林对exoS,exoUmRNA的表达的影响的研究,将丰富抗感染策略。为临床治疗过程中的药物选择提供理论依据。研究方法：1.菌株收集、药敏试验：2007年1月至2009年3月天津市某医院细菌室分离43株铜绿假单胞菌(31株来自痰,5株来自尿,4株来自分泌物,3株来自血),K-B纸片法研究细菌对9种常用抗菌药物(头孢他啶,头孢吡肟,头孢曲松,头孢哌酮／舒巴坦,左氧氟沙星,环丙沙星,阿米卡星,哌拉西林,美罗培南)的耐药情况2.通过聚合酶链式反应(PCR)调查毒素基因exoS,exoU在铜绿假单胞菌临床株的携带情况,并依据不同的毒素基因将其分成两组,比较它们的耐药率3.20例铜绿假单胞菌肺炎患者来自2008年6月至2009年3月天津市某医院感染科的住院病人,20株铜绿假单胞菌分别来自上述患者的痰标本,按铜绿假单胞菌携带不同的毒素基因把患者分为两组,exoS组和exoU组。通过前瞻性队列研究比较两组患者的预后4.应用RT-PCR方法通过体外细菌实验研究阿奇霉素及赖氨匹林对铜绿假单胞菌两种毒素exoS,exoU mRNA表达的影响。结果：1.43株铜绿假单胞菌临床株中37株(86%)exoS阳性,其余6株(14%)exoU阳性,没有一株菌同时携带两种基因2. exoU组临床株对9种抗菌药物的耐药率均高于exoS组,其中头孢他啶,环丙沙星,左氧氟沙星的耐药率差异均有统计学意义3.20例铜绿假单胞菌肺炎患者,exoS组17例,exoU组3例,exoS组中重症肺炎患者4例(23.5%),平均住院天数17±5天,而exoU组患者全部(100%)为重症肺炎,平均住院天数36±12天4.体外细菌实验显示,不同浓度阿奇霉素作用于铜绿假单胞菌后,exoS的相对灰度值较空白对照组升高,在2μg/ml组最高,随着阿奇霉素浓度的增高,相对灰度值逐渐降至空白对照水平,阿奇霉素作用后,exoU的相对灰度值较空白对照组明显减低5.不同浓度的赖氨匹林作用于铜绿假单胞菌后,exoS的相对灰度值无明显改变,exo U的相对灰度值无明显改变。结论：1.铜绿假单胞菌临床株携带毒素基因exoU的细菌所占比例较低,耐药率高。2.铜绿假单胞菌肺炎感染中,携带毒素基因exoU的细菌所占比例较低,但细菌所致重症肺炎比例高。3.体外细菌实验显示,阿奇霉素促进了铜绿假单胞菌毒素基因exoS mRNA表达,2μg/ml时exoS mRNA表达水平最高,随着阿奇霉素浓度的增高,exoS mRNA表达水平逐渐降至空白对照水平；阿奇霉素抑制了exoU mRNA表达。4.赖氨匹林对exoS, exoU mRNA表达无明显影响。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语/符号说明  10-11
前言  11-13
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-13
一、毒素基因exoS,exoU在铜绿假单胞菌临床株的携带及耐药情况的研究  13-28
  1.1 对象和方法  13-20
    1.1.1 对象  13-15
    1.1.2 方法  15-20
  1.2 结果  20-25
    1.2.1 PCR扩增及DNA序列分析  20-22
    1.2.2 不同标本携带毒素基因exoS,exoU情况  22
    1.2.3 细菌药敏结果  22-25
  1.3 讨论  25-27
  1.4 小结  27-28
二、铜绿假单胞菌临床株毒素基因exo S,exoU与肺炎预后的关系  28-34
  2.1 对象和方法  28-29
    2.1.1 对象  28
    2.1.2 重症肺炎诊断标准  28
    2.1.3 调查方法和内容  28-29
    2.1.4 统计学方法  29
  2.2 结果  29-30
    2.2.1 一般资料比较  29
    2.2.2 两组患者预后比较  29-30
  2.3 讨论  30-33
  2.4 小结  33-34
三、阿奇霉素和赖氨匹林对铜绿假单胞菌毒素基因exoS,exoU mRNA表达的影响  34-48
  3.1 对象和方法  34-39
    3.1.1 对象  34-35
    3.1.2 方法  35-39
  3.2 结果  39-45
    3.2.1 阿齐霉素和赖氨匹林的最低抑菌浓度  39-40
    3.2.2 总RNA提取结果  40
    3.2.3 不同浓度的阿奇霉素对exoS和exoU mRNA的表达的影响  40-42
    3.2.4 不同浓度的赖氨匹林对exoS和exoUmRNA的表达的影响  42-45
  3.3 讨论  45-47
  3.4 小结  47-48
结论  48-49
参考文献  49-54
发表论文和参加科研情况说明  54-55
综述  55-65
  铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统  55-60
  综述参考文献  60-65
致谢  65-66

毒素基因exoS，exoU在铜绿假单胞菌临床株中的携带情况及对肺炎预后的影响

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