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西瓜全雌基因连锁的SRAP分子标记

作　者: 朱小茜
导　师: 孙治强；徐小利
学　校: 河南农业大学
专　业: 蔬菜学
关键词: 西瓜 全雌基因 F2群体 SRAP 分子标记
分类号: S651
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 2次
引　用: 0次
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内容摘要


采用SRAP技术探寻与西瓜全雌基因连锁的分子标记。以全雌母本和弱雌父本为双亲杂交获得F1群体, F1自交获得F2群体,用分离群体分组分析法(Bulked Segregant Analysis, BSA)构建全雌和弱雌两个基因池,筛选957对引物结果如下:1、为研究西瓜全雌性状的遗传规律,以全雌性母本HC和弱雌性父本QC杂交获得F1,共得到F1单株6株。F1群体自交获得F2,共得到F2单株275株。观察F1群体单株,均表现弱雌性,说明西瓜全雌性对弱雌性为隐性。对F2单株进行性型统计,将统计的有效节位在25节以上的单株所得数据进行整理,共计114株,包括雌性单株30株、弱雌性单株84株。经X2检测,F2中雌性株与弱雌株分离比例完全符合1:3的比例( P值= 0.104),以上结果说明,西瓜全雌性状可能是由单隐性基因控制的质量性状。2、本实验采用CTAB法和经改良的CTAB法对西瓜叶片的基因组DNA进行提取,并进行比较,结果表明:采用改良CTAB法提取效果较好,所提取的DNA质量较优,完全达到了用于SRAP分析的要求。3、本试验以西瓜基因组DNA为模板,通过对Mg2+、dNTPs、Primer、DNA与Taq酶5因素进行5水平梯度试验,对西瓜SRAP-PCR反应体系进行了优化,建立了适合于西瓜的SRAP-PCR反应体系。最终确定的西瓜SRAP-PCR反应体系(15μL)为: Mg2+ 3.0mmol/L,引物0.3mol/l,TaqDNA聚合酶1.0U/20L,dNTPs 0.20mmol/l,DNA模板80ng。结果表明该体系和程序可满足西瓜基因组SRAP扩增的需求。4、选用33个正向引物和29个反向引物两两配对组合成957对引物,对西瓜父本QC与母本HC的全基因组DNA进行扩增,筛选出在父本和母本间表现多态的引物对共36对。用在父母本之间表现出多态性的36对引物组合分别对对西瓜全雌、弱雌两个基因池(随机选取5株全雌单株和5株弱雌单株的个体基因组DNA等量混合,组成全雌和弱雌两个DNA池)进行扩增,有8对引物的PCR扩增产物在两基因池之间稳定的表现出差异。用在全雌基因池和弱雌基因池之间表现多态性的8对引物,分别对构建基因池的5株全雌单株和5株弱雌单株进行PCR验证。结果发现:只有引物对me16-em20与西瓜全雌性表型存在连锁关系,全部全雌株上均扩增出一条约为160bp的特异条带,在弱雌株上未出现,将该标记命名为me16-em20160;而在弱雌株上均扩增出一条约为205bp的特异条带,在全雌株上未出现,将该标记命名为me16-em20205。用该引物对对F2共117株单株分别进行扩增,统计结果,利用Mapmaker ( version 3.0)计算出这两个标记与全雌性位点的连锁距离分别为11.4cM、18.4cM。

全文目录


致谢  4-8摘要  8-91 文献综述  9-22  1.1 遗传标记的定义和分类  9-15    1.1.1 形态标记  9    1.1.2 细胞学标记  9-10    1.1.3 生化标记  10    1.1.4 分子标记  10-15      1.1.4.1 基于Southern 杂交的分子标记  11      1.1.4.2 基于PCR 反应的标记技术的分子标记  11-13      1.1.4.3 基于DNA 芯片技术的标记技术  13-15  1.2 SRAP 标记的原理与研究现状  15-17    1.2.1 SRAP 标记的原理  15    1.2.2 SRAP 标记的研究现状  15    1.2.3 SRAP 标记的应用  15-17      1.2.3.1 遗传多态性及亲缘关系研究  15-16      1.2.3.2 遗传图谱构建  16      1.2.3.3 比较基因组学研究  16      1.2.3.4 分子标记与基因定位  16-17      1.2.3.5 种子纯度鉴定及品种鉴定研究  17  1.3 分子标记在西瓜上的应用  17-19    1.3.1 种质资源遗传多态性与品种纯度鉴定  17-18    1.3.2 目标性状的连锁分子标记与分子标记辅助育种  18    1.3.3 遗传图谱构建  18-19  1.4 植物性别研究  19-22    1.4.1 植物性别研究概况  19-20    1.4.2 西瓜的性别研究进展  20-22      1.4.2.1 葫芦科植物性别类型  20      1.4.2.2 西瓜全雌基因的发现  20-21      1.4.2.3 西瓜全雌系的利用  21-222 引言  22-233 材料与方法  23-27  3.1 供试材料  23  3.2 试验方法  23-27    3.2.1 遗传规律分析  23      3.2.1.1 田间种植  23      3.2.1.2 分析遗传规律  23    3.2.2 SRAP 分析  23-27      3.2.2.1 西瓜基因组 DNA 提取  23-24      3.2.2.2 西瓜基因组DNA 质量检测  24      3.2.2.3 DNA 的稀释和基因池的构建  24      3.2.2.4 PCR 扩增产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳  24      3.2.2.5 SRAP-PCR 扩增  24-25      3.2.2.6 引物设计和多态性引物的筛选  25      3.2.2.7 连锁性分析  25-274 结果与分析  27-39  4.1 全雌性遗传规律分析  27    4.1.1 田间调查结果  27    4.1.2 遗传规律分析  27  4.2 西瓜基因组DNA 提取和基因池的构建  27-30    4.2.1 两种方法提取西瓜基因组DNA 的效果比较  27-29    4.2.2 基因池构建  29-30  4.3 优化体系的稳定性检测  30-33    4.3.1 Mg 2+ 浓度对SRAP- PCR 结果的影响  30    4.3.2 引物浓度对SRAP- PCR 结果的影响  30-31    4.3.3 Taq 酶浓度对SRAP- PCR 结果的影响  31    4.3.4 dNTPs 浓度对SRAP- PCR 结果的影响  31-32    4.3.5 DNA 浓度确定  32-33    4.3.6 SRAP-PCR 扩增反应体系各因素最适浓度的验证  33  4.4 SRAP 引物的筛选  33-39    4.4.1 SRAP 引物在亲本间的多态性  33-35    4.4.2 SRAP 引物在全雌和弱雌DNA 池间的多态性  35-37    4.4.3 多态性标记在建池单株中的检测  37    4.4.4 多态性标记在F2 代单株中的检测及连锁距离的确定  37-395 结论与讨论  39-43  5.1 结论  39-40  5.2 讨论  40-43参考文献  43-50附录  50-51Abstract  51-53英文缩略词  53

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 瓜果园艺 > 西瓜
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