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迷迭香酸对6-OHDA损伤大鼠多巴胺能神经元的保护作用

作　者: 王洁玉
导　师: 孙鹏；姜宏
学　校: 青岛大学
专　业: 神经外科
关键词: 帕金森病 迷迭香酸 6-OHDA 氧化应激 铁
分类号: R742.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是第二大神经系统退行性疾病,发病率仅次于阿尔茨海默病。该病多发于中老年人,65岁以上人群PD患病率近1.7%。随着社会的老龄化,该病的发病人数呈逐年递增趋势,已成为严重影响人民健康水平,阻碍经济发展的重大社会问题。PD最主要的病理改变为黑质致密带(substantia nigra par compacta, SNpc)多巴胺(dopamine, DA)能神经元脱失及伴发的纹状体轴突末梢DA的耗竭。典型的临床表现为肌僵直、静止性震颤及姿势异常等症状。PD的确切病因和发病机制尚不清楚,可能与遗传因素、环境因素、氧化应激、炎症反应、黑质(substantia nigra, SN)铁聚积和细胞凋亡等多种因素有关。临床治疗PD首选药物为左旋多巴,尽管应用此类药物是目前最有效的帕金森病治疗方法。但是这些药物只在发病早期有效,长期使用伴有严重的副反应。因此寻找天然、高效、低毒的神经保护药已成为新的研究热点。迷迭香酸(rosmarinic acid, RA)是一种水溶性的含多酚羟基的酸,1958年首选从迷迭香类植物(rosmarinius officinalis)中分离提取而得名。已有实验证明RA具有抗炎、抗氧化、螯合铁离子、清除自由基等多种生物活性。本实验室已经证实RA预处理MES23.5细胞能够拮抗MPP+对其的毒性作用,其保护作用的机制可能与其抗氧化及抗凋亡机制相关。为了进一步探讨RA对PD是否具有防治作用及对DA能神经元保护作用的可能机制。本实验应用了6-羟基多巴胺(6-OHDA)单侧损毁大鼠,制备帕金森病(PD)大鼠模型,从而观察了RA对受损大鼠黑质多巴胺(DA)能神经元的保护作用。应用高效液相电化学检测法(HPLC-ECD),观察了6-OHDA予处理后,大鼠Str的DA的含量变化；应用免疫组织化学检测法,观察了大鼠SN区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元细胞数目变化情况；应用Perls’铁染色方法,观察了大鼠SN区铁染色阳性细胞数变化情况；同时还应用行为学检测、RT-PCR技术观察了RA对这些改变的影响,为RA对PD治疗和预防提供了有价值的理论和实验依据。实验结果如下：1.与正常对照组相比,6-OHDA处理大鼠后,损毁侧Str的DA含量明显降低(P<0.05), RA (20mg/kg)预处理组的DA含量与6-OHDA组相比,有明显升高(P<0.05),具有统计学意义。2.在6-OHDA舜伤侧的大鼠黑质致密带,TH免疫染色阳性细胞数量显著减少,与正常相组比具有显著性差异,(P<0.01)具有统计学意义,而经RA (20mg/kg)预处理后,TH免疫阳性细胞数明显增多,与6-OHDA组比较有统计学意义(P<0.01)。3.6-OHDA损伤侧的大鼠黑质致密带,铁染色阳性细胞数与正常组相比显著增多,而经过RA (20mg/kg)预先处理以后,迷迭香酸能够有效抑制这种损伤效应,其SN区铁染色阳性细胞数量明显减少,经检验与单纯损伤组比较都具有统计学意义(P<0.01)。4.在行为学检测中发现,经过迷迭香酸RA (20mg/kg)预处理过后的大鼠旋转行为学检测试验,其旋转次数明显低于损伤组大鼠,经检验,其差别具有明显统计学意义(P<0.01)。5.经过迷迭香酸RA (20mg/kg)予处理大鼠后,大鼠Bcl-2 mRNA基因水平明显降低,Bax mRNA基因水平明显升高,Bcl-2/Bax比值下降,THmRNA基因水平明显升高,经单因素方差分析,各组间差别具有统计学意义(P<0.05)。上述结果提示,6-OHDA处理大鼠可引起典型的行为学改变,DA的含量明显降低,SN内铁含量升高,TH免疫阳性细胞数目显著减少,Bcl-2/Bax比值升高,而经RA预处理以后可明显拮抗上述变化,证明其保护机制可能是通过抗氧化应激、螯合铁离子实现的。本研究为应用RA防治帕金森病提供了有力的实验依据,为该药的新用途和进一步开发提供了实验依据。

全文目录


摘要  2-4
英文摘要  4-7
引言  7-9
材料和方法  9-16
  1. 工具药与常用试剂  9-10
  2. 动物准备  10
  3. 实验仪器  10
  4. 动物分组  10-11
  5. 行为学检测  11
  6. Str内DA含量的测定(HPLC)  11-12
  7. TH免疫组织化学测定  12-13
  8. 铁染色  13
  9. RT-PCR检测细胞中TH、Bcl-2、Bax mRNA的表达  13-15
  10. 统计学处理  15-16
结果  16-20
  1. RA抑制6-OHDA引起的大鼠旋转行为改变  16
  2. RA对6-OHDA损毁大鼠str内DA含量的影响  16
  3. RA对6-OHDA损毁大鼠黑质TH阳性细胞数影响  16-17
  4. RA对6-OHDA损毁大鼠黑质铁染色阳性细胞数的影响  17
  5. RA对大鼠黑质中TH、Bcl-2、Bax mRNA表达的影响  17-20
讨论  20-23
结论  23-24
参考文献  24-26
综述  26-43
  参考文献  35-43
攻读学位期间的研究成果  43-44
附录 (缩略词表)  44-46
致谢  46-47

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑部疾病 > 震颤麻痹综合征
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