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肉苁蓉多糖的免疫调节活性及吸收特性研究

作　者: 王翔岩
导　师: 齐云
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生药学
关键词: 肉苁蓉多糖 淋巴细胞增殖 巨噬细胞活化 口服吸收 Caco-2 细胞模型
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的通过考察肉苁蓉多糖（polysaccharides of Cistanche deserticola CDPS）对小鼠脾淋巴细胞增殖及巨噬细胞活化的作用,研究肉苁蓉多糖的免疫调节药理学活性,并通过不同角度和层次对其吸收特性进行研究。方法MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖。环磷酰胺（cyclophosphamide CTX）复制免疫功能低下的动物模型,分别测定正常及免疫低下动物脾脏、胸腺指数。胸腺细胞增殖法测定白细胞介素-2（IL-2）活性。采用中性红法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性;Griess试剂法测定NO释放量;L929细胞法及小鼠胸腺细胞法测定TNF-α及IL-1释放。碳粒廓清法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。在建立的Caco-2单层细胞模型上通过测定每孔电阻值(Rtrue tissue,比较膜两侧碱性磷酸酶（ALP）活性,确定Caco-2细胞单层的可靠性。测定CDPS经Caco-2单层细胞模型A→B 3h转运后受侧浓度,计算其药效Papp值,从体外模型判断CDPS的吸收特性;经体外和体内口服给药药效比较及口服给药途径和腹腔注射给药途径药效的比较从不同角度对肉苁蓉多糖口服吸收特性进行判断。结果CDPS在剂量达7.8mg/L时可促进丝裂原（ConA及LPS）活化淋巴细胞增殖及IL-2的分泌,对未活化淋巴细胞剂量需达25mg/L时加药组与对照组吸光度值才有显著性差异。腹腔给药显示CDPS（125mg/kg）可明显提高正常及免疫低下小鼠的脾指数,对因CTX所致胸腺指数的降低也有显著地对抗作用。CDPS在6.2550mg/L剂量范围内可剂量依赖性地增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;在2.8100mg/L剂量范围内可使正常和免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放明显增加;在0.567.2mg/L或3.610mg/L范围促进RAW264.7细胞TNF-α或IL-1产生,均具有良好的量效关系。CDPS可在一定程度上提高CTX致免疫功能低下小鼠碳粒廓清指数K。Rtrue tissue值在细胞单层形成过程中稳定增长,细胞模型两侧培养液中ALP活性差异逐步加大,表明建立的Caco-2细胞模型在完整性、细胞极性方面符合药物吸收特性研究的要求,CDPS过Caco-2细胞模型求得Papp值为9.41×10-8cm/s＜10×10-6cm/s;对于相同或相关药效指标,CDPS显示出体外及腹腔给药有效,而口服（体内）无效的特征。结论CDPS明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖,提高正常及免疫抑制小鼠的脾指数,该作用可能与其促IL-2分泌有关。CDPS可显著提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,活化巨噬细胞。显示CDPS是肉苁蓉免疫调节的主要物质基础。但口服吸收不良,因此临床应综合权衡,选择适合的给药方式,以达最佳疗效。

全文目录


英汉及缩略语对照表  7-8
中文摘要  8-10
Abstract  10-13
前言  13-18
  1 植物多糖的药理学活性研究进展  13
  2 植物多糖吸收特性相关研究  13-14
  3 肉苁蓉多糖的研究进展  14
  4 本课题的切入点  14-15
  参考文献  15-18
第一部分 肉苁蓉多糖的促淋巴细胞增殖作用  18-31
  1 实验材料与仪器  18-19
    1.1 实验材料  18
    1.2 仪器  18-19
  2 实验方法  19-21
    2.1 体外实验  19-20
      2.1.1 受试药液的配制:  19
      2.1.2 肉苁蓉多糖对脾细胞的58h细胞毒  19
      2.1.3 肉苁蓉多糖对未活化脾淋巴细胞的增殖作用  19
      2.1.4 肉苁蓉多糖对LPS活化的B淋巴细胞和的增殖作用  19-20
      2.1.5 肉苁蓉多糖对ConA活化的T淋巴细胞的增殖作用  20
      2.1.6 肉苁蓉多糖对脾淋巴细胞IL-2释放的作用  20
    2.2 体内实验  20-21
      2.2.1 对正常小鼠免疫器官重量影响  20
      2.2.2 对免疫功能低下小鼠免疫器官重量影响  20-21
    2.3 统计分析  21
  3 结果  21-28
    3.1 体内实验  21-27
      3.1.1 肉苁蓉多糖对脾细胞的58h细胞毒  21-22
      3.1.2 肉苁蓉多糖对未活化脾淋巴细胞的增殖作用  22-23
      3.1.3 肉苁蓉多糖对LPS活化的B淋巴细胞和的增殖作用  23-24
      3.1.4 肉苁蓉多糖对ConA活化的T淋巴细胞的增殖作用  24-25
      3.1.5 肉苁蓉多糖对脾淋巴细胞IL-2释放的作用  25-27
    3.2 体内实验  27-28
      3.2.1 对正常小鼠免疫器官重量影响  27
      3.2.2 对免疫功能低下小鼠免疫器官重量影响  27-28
  4 讨论  28-29
  参考文献  29-31
第二部分 肉苁蓉多糖对巨噬细胞功能的影响  31-51
  1 实验材料与仪器  31-32
    1.1 实验材料  31
    1.2 仪器  31-32
  2 实验方法  32-36
    2.1 体外实验  32-35
      2.1.1 受试药液的配制:  32
      2.1.2 肉苁蓉多糖对RAW264.7细胞24h细胞毒  32
      2.1.3 肉苁蓉多糖对RAW264.7细胞NO释放的影响  32-33
      2.1.4 CDPS对地塞米松(DEX)免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放的影响  33
      2.1.5 肉苁蓉多糖对RAW264.7细胞TNF-α释放的影响  33-34
      2.1.6 肉苁蓉多糖对RAW264.7细胞IL-1释放的影响  34
      2.1.7 肉苁蓉多糖对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的影响  34-35
      2.1.8 肉苁蓉多糖对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞NO释放的影响  35
    2.2 体内实验  35-36
      2.2.1 肉苁蓉多糖对化疗药环磷酰胺(CTX)致免疫功能下降的影响(碳粒廓清法)  35-36
    2.3 统计分析  36
  3.结果  36-47
    3.1 体外实验  36-46
      3.1.1 肉苁蓉多糖对RAW264.7细胞24h细胞毒  36-37
      3.1.2 CDPS对RAW264.7细胞NO释放的影响  37-39
      3.1.3 肉苁蓉多糖对地塞米松(DEX)免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放的影响  39-41
      3.1.4 肉苁蓉多糖对RAW264.7细胞TNF-α释放的影响  41-42
      3.1.5 肉苁蓉多糖对RAW264.7细胞IL-1释放的影响  42-43
      3.1.6 肉苁蓉多糖对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的影响  43-44
      3.1.7 肉苁蓉多糖对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞NO释放的影响  44-46
    3.2 体内实验  46-47
      3.2.1 肉苁蓉多糖对化疗药(CTX)致免疫功能下降的影响  46-47
  4 讨论  47-48
    4.1 巨噬细胞与免疫  47
    4.2 巨噬细胞分泌细胞因子与免疫  47-48
    4.3 单核-巨噬细胞吞噬功能与免疫  48
  参考文献  48-51
第三部分 肉苁蓉多糖吸收特性的研究  51-73
  1 实验材料与仪器  51-52
    1.1 实验材料  51-52
    1.2 实验仪器  52
  2 实验方法  52-57
    2.1 采用Caco-2细胞模型评价肉苁蓉多糖口服吸收特征  52-54
      2.1.1 Caco-2细胞模型的建立  52
      2.1.2 Caco-2细胞模型的验证  52-53
      2.1.3 肉苁蓉多糖对Caco-2细胞24h细胞毒  53
      2.1.4 肉苁蓉多糖经Caco-2细胞模型转运实验  53-54
    2.2 肉苁蓉多糖体外与体内(口服)相关药效指标对比研究  54-56
      2.2.1 肉苁蓉多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响  54-55
      2.2.2 肉苁蓉多糖对小鼠淋巴细胞增殖的影响  55-56
    2.3 肉苁蓉多糖体内不同给药途径(口服、腹腔)药效对比研究  56
      2.3.1 肉苁蓉多糖不同给药途径对(免疫抑制)小鼠巨噬细胞吞噬功能影响的比较(碳粒廓清)  56
      2.3.2 肉苁蓉多糖不同给药途径对小鼠免疫器官重量影响的比较  56
    2.4 统计分析  56-57
  3 实验结果  57-68
    3.1 采用Caco-2细胞模型评价肉苁蓉多糖口服吸收特征  57-61
      3.1.1 Caco-2细胞模型的验证  57-58
      3.1.2 肉苁蓉多糖对Caco-2细胞24h细胞毒作用  58-59
      3.1.3 肉苁蓉多糖经Caco-2细胞模型A→B3h转运  59-61
    3.2 肉苁蓉多糖体外与体内(口服)相关药效指标对比研究  61-66
      3.2.1 肉苁蓉多糖体外和口服给药对巨噬细胞吞噬功能的影响  61-64
      3.2.2 肉苁蓉多糖体外和口服给药对小鼠淋巴细胞增殖的影响  64-66
    3.3 肉苁蓉多糖体内不同给药途径(口服、腹腔)药效对比研究  66-68
      3.3.1 肉苁蓉多糖不同给药途径对(免疫抑制)小鼠巨噬细胞吞噬功能影响的比较  66-67
      3.3.2 肉苁蓉多糖不同给药途径对小鼠免疫器官重量影响的比较  67-68
  4、讨论  68-71
    4.1 通过Caco-2细胞模型(体外)研究肉苁蓉多糖口服吸收特性  68-70
      4.1.1 肉苁蓉多糖口服吸收研究体外模型的选择  68-69
      4.1.2 Caco-2细胞模型的验证  69-70
      4.1.3 肉苁蓉多糖经Caco-2细胞模型的转运  70
    4.2 通过体外与体内(口服)药效比较研究肉苁蓉多糖口服吸收特性  70-71
    4.3 通过体内不同给药途径药效比较研究肉苁蓉多糖口服吸收特性  71
    4.4 小节  71
  参考文献  71-73
结论  73-74
致谢  74-75
附 细胞照片  75-78

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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