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氧化应激对NKG2D配体表达的影响

作　者: 李成红
导　师: 何维；崔莲仙；马驰
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 氧化应激 NKG2D配体 NK细胞细胞毒活性动物模型
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 26次
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内容摘要

NKG2D是淋巴细胞活化型受体之一,主要表达在NK细胞、CD8⁺αβT细胞、γδT细胞等免疫细胞表面,在免疫应答中起着非常重要的作用。NKG2D有多种配体,现已发现的配体包括人的UL-l6结合蛋白（UL-l6 binding proteins,ULBPs）、非经典性MHCⅠ类链相关分子A/B（MHC classⅠchain-related molecules A/B,MICA/B）和鼠的维甲酸诱导的基因（Retinoic acid inducible genes-1,RAE1,α、β、γ、δ、ε）、次要组织相容性抗原H60（the minor hitocompatibility antigen,H60,A,b,c）和鼠的ULBP样转录产物1（murine ULBP-like transcript 1,MULT1）。NKG2D配体分子在正常组织中低表达或不表达,但在肿瘤组织或处于氧化应激、热休克、病毒感染等应激状态时表达上调。据报道,氧化应激可使气道上皮细胞NKG2D配体的某些分子表达上调。本工作旨在研究氧化应激对NKG2D配体表达及其功能的影响。主要工作如下:一、氧化应激对细胞NKG2D配体表达影响的研究我们选取8种肿瘤细胞以及从正常人外周血中分选T细胞和单核来源的树突状细胞（the monocyte-derived dendritic cell,moDC）,在培养基中加H₂O₂使其处于氧化应激状态。应用RT-PCR、Real-time PCR和流式细胞仪等方法分别从mRNA水平和蛋白水平检测肿瘤细胞ULBPs及MICA/B的表达变化,流式细胞仪分析氧化应激对T细胞和moDC ULBPs及MICA/B表达的影响。并针对氧化应激前后不同肿瘤细胞ULBPs及MICA/B表达的不同变化,选取五种细胞分析其变化对NK细胞功能的影响。结果显示,无论是肿瘤细胞,还是正常细胞都仅表达众多NKG2D配体中的一种或几种,而且各种细胞的表达谱各不相同。细胞NKG2D配体在mRNA水平与细胞表面的蛋白表达并不完全一致;其中BGC823细胞表面蛋白与mRNA的表达较为一致。在氧化应激之后各种配体的表达都有所升高,293T、Raji和K562细胞的大多数NKG2D配体在氧化应激之后都有不同程度的提高。而Jurkat、HO8910、HeLa和Daudi细胞表面表达的配体种类很少,并且表达情况在应激前后几乎没有变化。新鲜分离的T细胞应激前仅表达低水平的ULBP2,而不表达MICA;氧化应激后诱导出现MICA表达而ULBPs的表达没有变化。moDC广泛表达多种NKG2D配体,但应激前后表达水平变化不大。氧化应激增强了NK细胞对BGC823、Raji细胞的杀伤功能,且此效应可被anti-NKG2D抗体阻断。氧化应激前后NK细胞对293T、Jurkat和HeLa细胞的杀伤作用变化不显著。二、小鼠氧化应激模型中NKG2D配体的表达研究建立小鼠吸入臭氧的动物氧化应激模型,利用RT-PCR、Real-time PCR和免疫组化方法分析氧化应激对小鼠各组织Rae1和MULT1表达的影响。并用流式细胞仪分析氧化应激前后小肠上皮细胞（iIEL）、脾脏和胸腺淋巴细胞的Rae1和MULT1的表达情况。Real-time PCR结果显示,应激后Rae1的表达在皮肤和淋巴结有所降低,在胸腺、小肠、脾脏表达升高。MULT1的表达在皮肤和小肠略有升高,但变化不明显;MULT1在脾脏和淋巴结的表达下降,在胸腺基本没有变化。而免疫组织化学的结果表明,小鼠氧化应激后,MULT1在胸腺的表达降低,在淋巴结的表达略有升高,在脾脏和小肠的表达基本没有变化;Rae1在胸腺表达略有升高,在淋巴结、脾脏和小肠的变化不明显。综上所述,氧化应激可以诱导细胞NKG2D不同配体的表达,从而提高NK细胞对其杀伤活性。然而动物氧化应激模型中NKG2D配体表达的升高并不明显,有的组织表达甚至降低。这提示体内可能存在着更为复杂的NKG2D配体表达调节机制。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
英文缩略词表  8-10
前言  10-12
材料和方法  12-25
实验结果  25-42
讨论  42-46
结论  46-47
参考文献  47-49
综述  49-65
  参考文献  58-65
个人简历  65-66
致谢  66-67

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