学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

辣椒再生体系的建立及FaNES1基因转化辣椒

作　者: 胡伟
导　师: 李汉霞
学　校: 华中农业大学
专　业: 蔬菜学
关键词: 辣椒 再生 遗传转化 FaNES1
分类号: S641.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 23次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


辣椒抗虫基因工程发展的最大障碍是辣椒离体再生困难,以致转化率太低。本研究以6个辣（甜）椒品种为试材,分别就基因型、外植体类型、苗龄、培养基成分等对辣椒离体再生的影响进行了较为系统的探讨,建立了辣椒的再生体系。在前人研究的基础上,通过对外源基因转化辣椒的转化培养条件的摸索,建立辣椒的遗传转化体系。通过农杆菌介导的方法将FaNES1导入辣（甜）椒,经过PCR检测,初步证实目的基因已整合到辣椒基因组中。主要结果摘要如下:1不同的辣（甜）椒品种在不同的培养基中其分化频率有较大差别。其中IAA0.5mg/L+6-BA 5mg/L对苏椒五号和Shakira的诱导频率最高,分别达到89.34%和82.37%;IAA 0.5mg/L+6-BA 6mg/L对Dallas的诱导频率最高,达74.16%;IAA 0.8mg/L+6-BA 5mg/L对Fiesta的诱导频率最高,达73.06%;IAA 0.8mg/L+6-BA 4mg/L对Polara的诱导频率最高,达70.06%;IAA1.0mg/L+6-BA 5mg/L对Olympus的诱导频率最高,达65.98%。。2培养基中添加AgNO3对辣（甜）椒外植体不定芽的诱导与伸长都没有影响;但是能有效地抑制外植体培养过程中的褐化现象。3 GA3的添加有利于不定芽的伸长,但是抑制不定芽的分化。不定芽的伸长频率随着GA3浓度的增加而增加,但当GA3浓度增加到3.0 mg/L时反而抑制不定芽的伸长,GA3的适合浓度为1.0～2.0 mg/L,能有效的促进不定芽的伸长。4在培养基中添加6-BA（0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L）与IAA（0、0.2、0.5 mg/L）,或ZT（0.5、1.0 mg/L）与GA3（0、0.5、1、1.5、2.0、3.0 mg/L）进行配组,结果表明Zt1.0mg/L+GA32.0mg/L对不定芽伸长效果最好。5设置卡那霉素（km）浓度为0mg/L、70～110mg/L,结果表明110mg/L的Km可完全抑制苏椒五号不定芽分化。6农杆菌感染前辣椒转化外植体进行预培养,感染后共培养及共培养后的延迟培养有利于子叶遗传转化效率的提高,在预培养阶段设置1d,2d,3d,4d,延迟培养设置0～4d,结果显示共培养最佳时间分别为2d,延迟培养的时间也为2 d。7在转化苗的生根阶段,Km明显的抑制根系的生长,选择不使用Km进行筛选为宜。8将橙花叔醇合酶基因FaNES1转化辣椒,得到转化植株。对部分转化植株提取DNA,经PCR检测,初步证明目的基因已整合到辣椒基因组中。

全文目录


摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
缩略词表  11-12
1 前言  12-22
  1.1 课题的提出  12
  1.2 辣椒外植体器官再生  12-15
    1.2.1 材料基因型  13
    1.2.2 外植体类型  13
    1.2.3 外界环境条件的影响  13-14
    1.2.4 培养基的影响  14
    1.2.5 激素的影响  14-15
    1.2.6 AgNO_3的影响  15
  1.3 辣椒遗传转化体系研究进展  15-17
  1.4 萜类化合物在植物抗虫中的研究  17-19
    1.4.1 天敌种类的选择  17
    1.4.2 挥发性混合物对天敌的吸引  17-18
    1.4.3 挥发物质释放时间的调节控制  18
    1.4.4 直接和间接防御之间的相互协调  18-19
  1.5 萜类基因FANES1研究进展  19-20
  1.6 课题研究内容、目的及意义  20-22
2 材料与方法  22-28
  2.1 试验材料  22-23
    2.1.1 植物材料  22
    2.1.2 菌株、基因及质粒载体  22
    2.1.3 基本培养基  22-23
  2.2 试验方法  23-24
    2.2.1 DNA的小量法提取程序  23-24
    2.2.2 质粒DNA的提取  24
    2.2.3 PCR扩增  24
  2.3 辣椒再生体系的建立  24-25
    2.3.1 无菌苗的获得和外植体的准备  24
    2.3.2 不定芽的诱导  24-25
    2.3.3 不定芽的伸长  25
    2.3.4 生根  25
  2.4 辣椒遗传转化体系的建立  25-28
    2.4.1 子叶外植体的Km抗性水平  25-26
    2.4.2 头孢霉素对辣椒再生的影响  26
    2.4.3 菌液的准备  26
    2.4.4 农杆菌侵染  26
    2.4.5 延迟选择培养  26
    2.4.6 选择培养  26
    2.4.7 转化苗的生根与移栽  26-28
3 结果与分析  28-41
  3.1 辣椒再生体系的建立  28-36
    3.1.1 不同激素配比对子叶诱导不定芽的影响  28-29
    3.1.2 不同激素配比对下胚轴不定芽诱导的影响  29-30
    3.1.3 不同有机成分对不定芽诱导的影响  30
    3.1.4 不同苗龄的子叶外植体对不定芽诱导的影响  30-32
    3.1.5 AgNO_3对子叶诱导不定芽的影响  32
    3.1.6 GA_3对不定芽诱导的影响  32-33
    3.1.7 GA_3对不定芽伸长的影响  33
    3.1.8 不同激素配比对不定芽伸长的影响  33-35
    3.1.9 AgNO_3对不定芽伸长的影响  35-36
    3.1.10 不同生长素对生根的影响  36
  3.2 辣椒遗传体系的建立  36-39
    3.2.1 外植体的Km抗性水平  36
    3.2.2 Cef浓度的筛选  36-37
    3.2.3 预培养天数对不定芽分化频率的影响  37
    3.2.4 侵染时间对转化效率的影响  37-38
    3.2.5 共培养天数对不定芽分化的影响  38
    3.2.6 延迟培养天数对不定芽分化的影响  38
    3.2.7 生根  38-39
  3.3 转基因植株的获得  39-40
  3.4 转基因植株的PCR检测  40-41
4 讨论  41-44
  4.1 基因型、外植体类型对辣椒再生的影响  41
  4.2 激素的使用  41-42
  4.3 AgNO_3的作用  42
  4.4 在一种培养基中成苗的探讨  42
  4.5 Km的应用  42-43
  4.6 通过子叶再生的转化体系  43
  4.7 后续工作  43-44
参考文献  44-50
致谢  50

相似论文

  1. 金属蜂窝与再生冷却通道的传热特性研究,V215.4
  2. 鹿茸配合生血汤治疗慢性再生障碍性贫血的临床观察,R259
  3. 牡蛎壳海卤缓释氮肥对辣椒和香菜生长影响的研究,S145.6
  4. 辣椒碱/β-环糊精体系溶解与渗透的相关性研究,R943
  5. 再生混凝土微粉/水泥基透水性复合材料的试验研究,TU528
  6. 综合利用建筑废渣灰、旧砂再生粉尘和污泥制备轻集料的研究,TU528.042
  7. 再生混凝土多孔砖用骨料及配合比试验研究,TU528
  8. 离子交换法去除原水中六价硒,X703
  9. 利用RNAi提高烟草对病毒的抗性及岷江百合遗传转化体系的初步构建,S435.72
  10. 再生骨料半干硬性混凝土制备与成型的试验研究,TU528
  11. 辣椒碱/环糊精体系的表征及性能研究,TQ450.1
  12. 聚丙烯腈基两性离子交换纤维的制备及性能研究,TQ342.31
  13. 哈尼族聚落乡土建筑“再生”之路研究,C95
  14. rd29A驱动RdreBlBI基因转化‘红颊’草莓的研究,S668.4
  15. 新疆紫草细胞的稀土生物学效应及遗传转化,S567.239
  16. 防治土传辣椒青枯病微生物有机肥研制与生物效应研究,S436.418
  17. 棉铃虫和烟夜蛾在4个辣椒品种上的寄主适合度差异研究,S436.418
  18. 辣椒疫病生防菌的筛选、鉴定及其微生物有机肥的生物效应研究,S436.418
  19. 新疆小麦1Dx5基因的分离克隆及表达载体构建,S512.1
  20. 赣东北再生稻轻型化种植模式播期优化及其对源库关系的影响,S511
  21. 大豆GmFtsH基因的遗传转化及功能分析,S565.1

中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 茄果类 > 辣椒
© 2012 www.xueweilunwen.com