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日粮碳水化合物水平对翘嘴红鲌生长、血液指标及GK、G6Pase、HSC70基因表达的影响

作　者: 王广宇
导　师: 戈贤平
学　校: 南京农业大学
专　业: 水产养殖
关键词: 翘嘴红(鱼白) 鱼体生长血液指标葡萄糖激酶(GK) 葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase) 热应激蛋白(HSC70) 基因表达
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)属鲤形目(Cypriniformes)、鲤科(Cyprinidae)、鲌亚科(Cultrinae)、红鲌属(Erythroculter Berg),是我国名贵淡水鱼类之一,因具有生长快、肉质细嫩、肉味鲜美、氨基酸含量高等优点而备受青睐,目前已成为重要的水产养殖品种。为了探讨翘嘴红鲌利用饲料碳水化合物的能力,以及不同碳水化合物含量饲料对翘嘴红鲌的影响,配制碳水化合物含量分别为0%、13%、19%、25%和31%的饲料,选用450尾翘嘴红鲌,分成5组,每组设三个重复。饲养10周后,然后测定不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌肝脏葡萄糖激酶(Glucokinase, GK, EC2.7.1.2)、葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase, G6Pase,EC 3.1.3.9)和热应激蛋白(The 70 kDa heat-shock cognate protein, HSC 70)基因表达水平的影响,同时测定了鱼体生长、鱼体成份、肝体比、肝糖元和血液指标等。1、翘嘴红鲌HSC70基因的克隆克隆得到了翘嘴红鲌HSC70 cDNA的全序列。将所得序列与其他物种的已知HSC70氨基酸序列进行同源性比较,并进行系统进化树分析。结果表明,翘嘴红鲌HSC70氧基酸序列与团头鲂(Megalobrama amblycephala)和异育银鲫(Carassius auratus gibelio)同源性都高达99%以上,与斑马鱼(Danio rerio)同源性也高达98%,与大口鲇(Silurus meridionalis)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)同源性达到95%,系统进化树表明翘嘴红鲌与团头鲂亲缘关系最为接近。2、不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌生长、鱼体组成、血液指标及肝糖元的影响在翘嘴红鲌摄食不同碳水化合物含量日粮70天后,统计各组的鱼体重量,并计算增重率、特定生长率、饵料系数等指标。结果25%碳水化合物组增重率和特定生长率最高；无碳水化合物组的饵料系数最高。这说明本试验的饲料配方对翘嘴红鲌的生长有一定影响。各组的丰满度没有显著差异(P>0.05),但是内脏比和肝体比随饲料中碳水化合物的增加成上升趋势,与其它组相比,31%碳水化合物组肝体比和内脏比显著(P<0.05)增加。表明长期投喂高碳水化合物饲料可能造成了翘嘴红鲌肝脏肿大。试验中投喂不同碳水化合物含量的饲料,对鱼体的水分和灰分无显著影响(P>0.05),但与无碳水化合物组相比,其它组的脂肪含量增加。表明长期投喂高碳水化合物饲料增加了翘嘴红鲌肌肉中脂肪的含量。与无碳水化合物组相比,其它各组血清中总蛋白含量显著(P<0.05)降低；血清甘油三酯的含量各组从0d、35d到70d总体呈下降趋势。在35d时,从无碳水化合物组到31%碳水化合物组血清中甘油三酯的含量呈下降趋势,在70d时,从13%碳水化合物组到31%碳水化合物组血清中甘油三酯的含量同样呈下降趋势。本试验中,在35d时,与无碳水化合物组相比,其它各组血清中总胆固醇含量显著(P<0.05)降低,同样在70d时,13%碳水化合物组和19%碳水化合物组显著(P<0.05)降低了血清中总胆固醇含量。这说明饲料中相对较高的碳水化合物含量可能导致翘嘴红鲌相关生理机能发生了变化,如糖代谢功能、肝脏组织细胞以及组织蛋白质合成等。在翘嘴红鲌摄食不同碳水化合物含量的饲料后,各组血糖的含量从0d、35d到70d总体呈上升趋势。在肝糖元含量方面,无碳水化合物组肝糖元的含量从0d、35d到70d总体呈上升趋势,但是35d到70d上升趋势不明显,而其它各组呈现先上升再下降的过程；在35d时和70d时,不同组之间血糖和肝糖元的变化也比较复杂,在31%碳水化合物组表现了低血糖和低肝糖的现象。这一方面说明饲料中碳水化合物促使了翘嘴红鲌血糖和肝糖元的升高,但另一方面也说明饲料中高碳水化合物饲料可能导致肝脏糖代谢功能异常,从而导致血糖和肝糖元的降低。3、饲料中不同碳水化合物水平对翘嘴红鲌GK和G6Pase基因表达的影响在翘嘴红鲌摄食不同碳水化合物含量日粮70天后,各组GK mRNA水平随饲料中碳水化合物含量的增加呈先上升再下降的趋势,其中19%碳水化合物组GK表达量最高,无碳水化合物组最低。与无碳水化合物组相比,19%碳水化合物组和25%碳水化合物组GK表达量差异显著(P<0.05)；同样在翘嘴红鲌摄食不同碳水化合物含量日粮70天后,各组G6Pase mRNA水平依次呈上升的趋势。与无碳水化合物组相比,25%碳水化合物组和31%碳水化合物组G6Pase表达量差异显著(P<0.05)。这说明日粮中添加相对较高的碳水化合物可能诱导了相关糖代谢酶的基因表达,从而更有利于鱼体对碳水化合物的利用。4、饲料中不同碳水化合物水平对翘嘴红鲌血液免疫指标和HSC70基因表达的影响在翘嘴红鲌摄食不同碳水化合物含量日粮70天后,与无碳水化合物组相比,25%碳水化合物组和31%碳水化合物组肝脏中HSC70 mRNA水平成增加趋势；相应的与无碳水化合物组相比,19%碳水化合物组、25%碳水化合物组和31%碳水化合物组血清中皮质醇含量显著(P<0.05)增加；血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活力从无碳水化合物组到31%碳水化合物组呈下降趋势；而血清中丙二醛(MDA)的含量随着饲料中碳水化合物的增加呈现先下降后上升的趋势,25%碳水化合物组和31%碳水化合物组增加了血清中MDA的含量。这说明饲料中高碳水化合物的水平可能引起了翘嘴红鲌应激反应,并降低了鱼体抗氧化能力。

全文目录

中文摘要  7-10
英文摘要  10-13
第一部分文献综述  13-24
  第一章鱼类碳水化合物营养研究进展  13-24
    1 肉食性鱼类利用碳水化合物的研究  13-14
    2 饲料碳水化合物节约蛋白质效果  14-15
    3 鱼类碳水化合物代谢调控  15-21
      3.1 葡萄糖  15
      3.2 糖代谢酶  15-21
        3.2.1 糖酵解酶  16-19
        3.2.2 糖异生酶  19-21
    4 碳水化合物与鱼类健康的关系  21-23
    5 本研究的目的、意义以及研究内容  23-24
      5.1 翘嘴红鲌的养殖地位及研究现状  23
      5.2 本研究的主要内容及意义  23-24
第二部分试验研究  24-53
  第二章不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌生长、鱼体组成、血液指标及肝糖元的影响  24-35
    1 材料与方法  24-26
      1.1 试验鱼种  24
      1.2 试验日粮  24
      1.3 饲养管理  24
      1.4 样本采集  24-25
      1.5 相关指标测定  25
      1.6 相关指标计算公式  25-26
      1.7 数据统计与分析  26
    2 结果与分析  26-32
      2.1 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌生长的影响  26
      2.2 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌肝体比、脏体比及丰满度的影响  26-27
      2.3 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌肌肉组成的影响  27-28
      2.4 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血液指标的影响  28-30
        2.4.1 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血清中总蛋白的影响  28
        2.4.2 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血清中甘油三酯的影响  28-29
        2.4.3 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血清中总胆固醇的影响  29
        2.4.4 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血糖的影响  29-30
      2.5 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌肝糖元的影响  30-31
      2.6 翘嘴红鲌肝脏透射电镜观察  31-32
    3 讨论  32-35
      3.1 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌生长的影响  32-33
      3.2 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌鱼体生化成分的影响  33
      3.3 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血液指标的影响  33-34
      3.4 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血糖和肝糖元的影响  34-35
  第三章不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌GK和G6Pase基因表达的影响  35-42
    1 材料与方法  35-39
      1.1 试验鱼种  35
      1.2 试验日粮  35
      1.3 饲养管理  35
      1.4 样本采集  35
      1.5 试剂和仪器  35
      1.6 引物设计  35-36
      1.7 mRNA的抽提  36
      1.8 SYBR荧光定量RT-PCR原理和方法  36-38
      1.9 数据统计与分析  38-39
    2 结果与分析  39-40
      2.1 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌GK基因表达的影响  39
      2.2 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌G6Pase基因表达的影响  39-40
    3 讨论  40-42
  第四章不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血液免疫指标和HSC70基因表达的影响  42-53
    1 材料与方法  42-44
      1.1 试验鱼种  42
      1.2 试验日粮  42
      1.3 饲养管理  42
      1.4 样本采集  42
      1.5 试剂和仪器  42
      1.6 血液免疫指标测定  42
      1.7 引物设计  42-43
        1.7.1 HSC70 mRNA分离引物  42-43
        1.7.2 HSC70基因表达引物  43
      1.8 HSC70基因的分离、克隆和表达  43-44
        1.8.1 提取总RNA  43
        1.8.2 PCR扩增HSC70基因部分片段  43-44
        1.8.3 3'RACE方法  44
        1.8.4 5'RACE  44
        1.8.5 SYBR荧光定量RT-PCR法原理和方法  44
      1.9 数据统计与分析  44
    2 结果与分析  44-51
      2.1 翘嘴红鲌HSC70基因的分离与克隆  44-46
      2.2 翘嘴红鲌HSC70序列比较  46-47
      2.3 翘嘴红鲌HSC70系统发育  47-48
      2.4 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌HSC70基因表达的影响  48-49
      2.5 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血清中皮质醇的影响  49
      2.6 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血清中超氧化物歧化酶(SOD)的影响  49-50
      2.7 不同碳水化合物含量日粮对翘嘴红鲌血清中丙二醛(MDA)的影响  50-51
    3 讨论  51-53
全文结论  53-54
参考文献  54-62
致谢  62-63
攻读硕士学位期间发表的学术论文  63

日粮碳水化合物水平对翘嘴红鲌生长、血液指标及GK、G6Pase、HSC70基因表达的影响

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