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血管生成素-1对油酸致小鼠肺损伤早期的保护作用及机制研究

作　者: 王俊
导　师: 黄建安
学　校: 苏州大学
专　业: 内科学
关键词: 血管生成素-1 急性肺损伤 ZO-1蛋白 VE-钙粘蛋白免疫印迹逆转录聚合酶链反应动物实验
分类号: R563.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的观察血管生成素-1(angiopoietin-1, Ang-1)对油酸导致的小鼠肺损伤(acute lung injury, ALI)早期的保护性作用及其对紧密连接相关ZO-1(zonula occludens-1)蛋白和VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)的调节作用,并初步探讨其机制。方法将140只雌性BALB/c小鼠随机分为7组,每组20只。肺损伤组(A组):从小鼠尾静脉注射油酸(0.2 ml/kg)制备肺损伤动物模型,4小时后腹腔注射等量生理盐水;肺损伤+Ang-1组(B组):建立肺损伤模型后4小时,腹腔注射血管生成素-1(312.5μg/kg);肺损伤+Ang-1+LY294002组(C组):建立肺损伤模型后4小时,腹腔注射血管生成素-1(312.5μg/kg),同时经腹腔注射PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002干预(100 mg/kg);肺损伤+LY294002组(D组):建立肺损伤模型后4小时,腹腔注射等量生理盐水,同时注射LY294002(100 mg/kg);正常对照组(E组):经过尾静脉注射等量生理盐水,4小时后再经腹腔注射等量生理盐水;正常对照+LY294002组(F组):经过尾静脉注射等量生理盐水,4小时后经腹腔注射LY294002(100 mg/kg);正常对照+Ang-1组(G组):经过尾静脉注射等量生理盐水,4小时后经腹腔注射血管生成素-1 (312.5μg/kg)。8小时后每组随机抽取半数小鼠断颈法处死,后进行肺泡灌洗;另一半处死后,右肺进行湿/干重检测,左肺留取标本检测。分别测定肺湿/干重比、肺泡灌洗液总细胞计数、中性细胞计数、蛋白含量变化;逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)法、蛋白印迹法(western blot)及免疫组化法测定肺组织中ZO-1、VE-cadherin的表达;光镜观察并盲法评分比较肺组织病理学改变。结果B组肺湿/干重比、肺泡灌洗液总细胞计数、中性细胞计数、蛋白含量及肺损伤评分分别为(4.02±0.24)、(33.84±2.56)×10~4/L、(19.78±1.64)×10~3/L、(162.84±17.26)μg/ml、(1.73±0.14),与A组[(5.29±0.20)、(42.84±3.67)×10~4/L、(26.11±2.49)×10~3/L、(227.98±13.06)μg/ml、(3.42±0.11)]及C组[(5.09±0.19)、(40.18±1.79)×10~4/L、(23.80±1.38)×10~3/L、(211.96±19.10)μg/ml、(3.20±0.22)]比较均有下降,差异具有统计学意义(P<0.05),而B组ZO-1、VE-cadherin的mRNA水平及蛋白表达水平均高于A组及C组,差异具有统计学意义(P<0.05);C组肺湿/干重比、肺泡灌洗液中性细胞计数、蛋白含量及肺损伤评分低于A组,差异具有统计学意义(P<0.05),但是灌洗液总细胞计数、ZO-1、VE-cadherin的mRNA水平及蛋白表达水平A组、C组之间不存在显著差异(P>0.05);B组肺湿/干重比、肺泡灌洗液总细胞计数、中性细胞计数、蛋白含量及肺损伤评分显著高于E组,两种蛋白mRNA水平及蛋白表达水平低于E组(P<0.05);A组与D组之间以及E组、F组、G组三组之间比较各指标差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论血管生成素-1减轻了油酸诱导的急性肺损伤小鼠早期的肺部渗出和炎症细胞浸润,阻止了肺损伤早期紧密连接相关ZO-1、VE-cadherin蛋白表达量的降低,其调节作用可以被LY294002抑制。本研究提示:Ang-1可能通过PI3K/Akt途径调节紧密连接相关ZO-1、VE-cadherin蛋白表达,进而对油酸诱导的小鼠早期急性肺损伤产生保护性作用。

血管生成素-1对油酸致小鼠肺损伤早期的保护作用及机制研究

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