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目的和意义:肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury, HIRI)存在于任何术式肝移植手术过程中,是造成原发性肝无功能的重要原因之一。导致HIRI的原因很多,目前多数认为其损伤机理主要与微循环障碍、氧自由基的产生、能量物质耗竭、钙离子超载、线粒体功能受损等因素有关。其中微循环障碍起重要作用,并决定最终肝组织的损伤程度。一氧化氮(nitric oxide, NO)和内皮素-1(endothelin-1, ET-1)是两种效用相反的血管活性物质,二者浓度失衡是HIRI微循环障碍的一个重要原因。因此,本实验在建立大鼠自体原位肝移植模型的基础上,探讨板蓝根多糖(indigowoad root polysaccharide,IRPS)对移植肝的影响及NO、ET-1含量变化与其关系,从而为临床实践提供参考,减轻术后的并发症,提高术后的生存质量和生存率。方法:SD大鼠,随机分为3组,NC组:正常对照组(n=32);AT组:自体肝移植组(n=32),术前2周持续给予蒸馏水30mg·kg-1·d-1灌胃处理;IRPS组:板蓝根多糖+自体肝移植组(n=32),术前2周持续给予板蓝根多糖30mg·kg - 1·d– 1灌胃处理。三组大鼠分别于术后1h、6h、12h、24h各取8只处死,经门静脉采血作血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的检测;光镜下观察肝细胞显微结构变化,透射电镜下观察肝细胞及线粒体的超微结构改变。结果:(1)大鼠手术成功的标准:大鼠即刻苏醒、翻身,并能维持有效的呼吸、心跳。无肝期控制为(20±2.2)min。(2)血清ALT、AST的情况:与NC组比较,AT组和IRPS组术后各时相点ALT及AST都有不同程度的升高,差异有统计学意义(P<0.05);但AT组与IRPS组相比较,AT组各时相点升高更加显著,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)血清NO、ET-1的情况:与NC相比,AT和IRPS两组术后各时相点血清NO含量都有不同程度的降低,ET-1含量都有不同程度的升高,差异有统计学意义(P <0.05);但AT组与IRPS组相比较,AT组各时相点NO降低及ET-1升高更加显著,差异有统计学意义(P <0.05)。(4)肝细胞显微结构:AT组术后1h,6h,12h,肝细胞中重度水肿,肝窦明显淤血狭窄,胞浆疏松,炎症细胞轻度增多,小叶结构基本完整;与AT组相比,IRPS组肝细胞仅表现为轻度水肿。24h后,AT组肝组织灶状坏死,汇管区及坏死灶淋巴细胞浸润;IRPS组24h仅见肝细胞弥漫性中度水肿,未见明显坏死灶,肝小叶结构完整。(5)肝细胞线粒体超微结构:AT组各时段肝细胞浓缩,细胞间隙变大,电子密度增高,细胞核皱缩变形,染色质粗糙,细胞器明显密集化,线粒体肿胀明显,膜模糊不清,部分膜破裂,线粒体嵴疏松溶解,有大量空泡形成;IRPS组肝细胞形态基本正常,线粒体仅表现为轻度肿胀,线粒体排列整齐。结论:板蓝根多糖可以减轻肝移植过程中的HIRI,其可能与提高NO水平、降低ET-1水平,减轻微循环障碍有关。
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