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MMP-2对人源黑色素瘤A375细胞粘附和迁移影响的研究

作　者: 冯雪
导　师: 曾宪录
学　校: 东北师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 基质金属蛋白酶2 明胶酶黑色素瘤整合素αvβ3
分类号: R739.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

恶性黑色素瘤因具有高度迁移性和致死性而被人们熟知。明胶酶,即基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9),在黑色素瘤迁移过程中参与基底膜降解和细胞外基质重构,与肿瘤恶性化程度密切相关。明胶酶不仅参与胞外基质与基底膜重构,在血管发生、侵润和迁移等肿瘤发生过程中发挥了重要作用。随着对明胶酶研究的深入,人们发现明胶酶不仅由肿瘤细胞分泌并且可以由基质细胞分泌,不仅能与细胞外基质蛋白相互作用,而且能与包括整合素在内的多种非基质蛋白相互作用。在黑色素瘤中,整合素αvβ3(integrin)是一类重要的异二聚体跨膜糖蛋白,能够与含有RGD片段的配体结合,通过这种结合αvβ3可以介导细胞外配体与胞内骨架蛋白和各种信号途径间的信号传递。然而,整合素αvβ3与MMP-2间的识别是通过MMP-2羧基端的PEX区而非RGD区,对于MMP-2是否能通过与αvβ3的这种结合而发挥一定的信号传递作用目前还没有报道。在本研究中,我们首先利用明胶酶谱法对A375细胞中明胶酶的表达进行了检测,证实在人源黑色素瘤A375细胞中MMP-2和MMP-9均有所表达。通过使用MMP广谱抑制剂对A375细胞铺展和迁移进行观察发现,MMP-2对A375细胞的影响比较显著。通过对A375细胞铺展过程中MMP-2和F-actin进行免疫荧光标记,发现MMP-2与肌动蛋白细胞骨架的变化有一定相关性。同时,免疫荧光标记观察发现MMP-2和整合素αvβ3在A375细胞悬浮、铺展和迁移三种状态下均有共定位现象。通过静止粘附实验我们证实,MMP-2能够影响整合素αvβ3与其配体的结合能力。这些结果表明,MMP-2在A375中可能通过整合素αvβ3而发挥某些信号作用从而影响肿瘤细胞的发展。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
引言  8-20
  一、明胶酶  8-14
    （一）基质金属蛋白酶  8-12
    （二）明胶酶及其结构特征  12-13
    （三）明胶酶的表达调控  13
    （四）明胶酶的作用  13-14
  二、整合素  14-17
    （一）整合素概况  14-16
    （二）整合素的功能  16-17
  三、明胶酶与整合蛋白αvβ3  17-19
    （一）明胶酶与细胞表面蛋白  18
    （二） MMP-2 与整合蛋白 αvβ3  18-19
  四、本论文研究的内容与意义  19-20
第一部分材料与方法  20-25
  一、实验材料  20-21
    （一）细胞及其培养试剂  20
    （二）抗体  20
    （三）其它试剂  20-21
    （四）仪器设备  21
  二、实验方法  21-25
    （一）细胞的培养及冻存  21
    （二）明胶酶谱法  21-22
    （三）琼脂糖滴剂中的迁移实验  22
    （四）免疫荧光分析  22-23
    （五）体外静止粘附实验  23
    （六）统计分析  23-25
第二部分结果与分析  25-33
  一、明胶酶在A375 细胞中的表达情况  25
  二、明胶酶抑制剂对A375 细胞铺展和迁移的影响  25-28
    （一）明胶酶对A375 细胞铺展的影响  25-27
    （二）明胶酶抑制剂对A375 细胞迁移的影响  27-28
  三、MMP-2 与肌动蛋白细胞骨架的相关性  28-30
  四、MMP-2 与合整素 αvβ3 的相关性  30-32
  五、MMPs 抑制剂对αvβ3 介导的 A375 细胞黏附的影响  32-33
第三部分讨论  33-36
  一、MMP-2 对 A375 细胞的迁移和铺展有重要作用  33
  二、MMP-2 可能通过影响肌动蛋白细胞骨架来影响 A375 细胞迁移与铺展  33-34
  三、MMP-2 与整合素αvβ3 的共定位进一步证明其影响骨架的可能性  34
  四、MMP-2 可能影响整合素αvβ3 与其配体的结合能力  34-36
结论和主要创新点  36-37
参考文献  37-44
致谢  44-45
在学期间公开发表论文及著作情况  45

MMP-2对人源黑色素瘤A375细胞粘附和迁移影响的研究

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