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H5N1亚型禽流感病毒对鸭的致病性研究

作　者: 许静
导　师: 陈化兰
学　校: 中国农业科学院
专　业: 预防兽医学
关键词: H5N1亚型禽流感病毒 感染 无特殊病原体鸭 致病性 TAP标签 聚合酶复合体 双荧光素酶报告基因检测系统
分类号: S858.32
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


鸭一直被认为是禽流感病毒的自然宿主,以前的研究发现病毒感染鸭后主要在肠道复制并排泄,但并不引起鸭发病。但近年来,H5N1亚型禽流感病毒在多个地区引起鸭禽流感暴发。为评估H5N1亚型禽流感病毒在实验室环境下对鸭的致病力,本研究以无特殊病原(SPF)鸭为模型,对我国近年分离的7株病毒进行了致病力分析。结果发现其中有4株病毒对鸭的致死率为100%,有2株病毒对鸭的致死率分别为60%和80%,另外1株病毒A/Goose/Hubei/65/0(5GS/HB/65/05),对鸭无致病力。本研究还发现与高致病力毒株一样,GS/HB/65/05也可在鸭体内呈全身性复制,并且可通过喉头和泄殖腔向外排毒。对这些病毒的系统研究,有利于揭示H5N1亚型禽流感病毒对鸭致病力的遗传机制。目前在基因水平上对于禽流感病毒的致病性和宿主范围的研究已取得了可喜的成果,但是从另一个角度上讲,蛋白质才是基因功能的实施者,我们希望通过对蛋白质的研究,更加完整的阐明禽流感病毒的生命现象。本实验针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV) DK/HB/49/05的聚合酶复合体的三种蛋白(PB2、PB1、PA蛋白)及NP蛋白,分别使用pcDNA3.1和C\N-terminal Mammalian TAP Vectors构建两种真核表达载体。转染293T细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统,研究一系列TAP标记蛋白替换后的重组聚合酶复合体在293T细胞内的活性。结果表明C或N端TAP标记的重组聚合酶在293T细胞内的活性有不同程度降低:在各种TAP标签重组聚合酶中,C端TAP标记的PB1和NP蛋白,会引起重组聚合酶复合体的活性降低10%左右,C端TAP标记的PA以及N端TAP标记的PB2和NP蛋白会造成重组聚合酶复合体的活性降低70%左右,而C端TAP标记的PB2以及N端TAP标记的PA和PB1则会造成重组后聚合酶活性降低约90%。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-11
第一章 引言  11-23
  1.1 H5N1 亚型高致病性禽流感病毒对鸭的致病性  11-13
  1.2 H5N1 高致病性禽流感病毒的生物学特性  13-17
    1.2.1 禽流感病毒的结构  13-14
    1.2.2 禽流感病毒聚合酶复合体的结构与功能  14-15
    1.2.3 RNP 与病毒致病性和宿主范围  15-17
  1.3 Minigenome system 与双荧光素酶报告基因检测系统  17-19
    1.3.1 Minigenome system  17-18
    1.3.2 双荧光素酶报告基因  18-19
    1.3.3 双荧光素酶报告基因的应用  19
  1.4 串联亲和纯化技术(Tandem affinity purification)  19-22
  1.5.研究的目的和意义  22-23
    1.5.1 H5N1 亚型禽流感病毒对鸭的致病性  22
    1.5.2 在293T 细胞中构建带TAP 标签的功能性流感病毒聚合酶复合体  22-23
第二章 H5N1亚型禽流感病毒对鸭的致病性研究  23-28
  2.1 实验材料  23
    2.1.1 病毒  23
    2.1.2 SPF 鸡胚及实验动物  23
  2.2 实验方法  23-24
    2.2.1 测定鸡胚半数感染量(EID50)  23-24
    2.2.2 动物感染试验  24
    2.2.3 采集拭子和脏器  24
    2.2.4 病毒在鸭体内的复制和排泄  24
  2.3 结果  24-26
    2.3.1 7 株病毒鸡胚半数感染量(EID50)测定结果  24-25
    2.3.2 7 株H5N1 亚型禽流感病毒对鸭的致病力实验结果  25
    2.3.3 不同致病力的H5N1 亚型禽流感病毒在鸭体内复制和排泄的比较研究  25-26
  2.4 讨论  26-28
第三章 在293T细胞中构建带TAP标签的功能性流感病毒聚合酶复合体  28-43
  3.1 实验材料  28
  3.2 实验方法  28-36
  3.3 结果  36-41
  3.4 讨论  41-43
第四章 结论  43-44
参考文献  44-51
致谢  51-52
作者简历  52

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸭
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