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北京油鸡脂肪干细胞的分离、培养与诱导分化研究

作　者: 宫雪莲
导　师: 关伟军
学　校: 中国农业科学院
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 北京油鸡 脂肪干细胞 分离培养 诱导分化潜能
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


20世纪90年代,世界范围内掀起了一股干细胞研究热潮,干细胞所具有的增殖与分化特性受到越来越多研究者的关注。在诸多成体干细胞的研究中,脂肪干细胞由于其独特的优势,在组织工程学领域逐渐突显出来。本研究首次以北京油鸡脂肪组织为试验材料,分离得到脂肪干细胞,对其培养条件进行了优化,建立了适合禽类脂肪干细胞体外培养的体系,对北京油鸡脂肪干细胞的基本生物学特性进行了研究,并且第一次对分离培养的北京油鸡脂肪干细胞的诱导分化潜能进行了探索,得出如下结论:1.通过对比不同胚龄及日龄北京油鸡脂肪干细胞的分离情况,以及不同培养体系对脂肪干细胞增殖能力的影响,确立了北京油鸡脂肪干细胞的体外分离培养方法:以1日龄北京油鸡腹部皮下及腹股沟处脂肪组织为材料,0.1%Ⅰ型胶原酶37℃条件下消化1 h获得脂肪干细胞。采用DMEM/F-12 + 10% FBS + 10 ng/ml bFGF + 1% B-27 + 2 mM L-谷氨酰胺+ 100 IU/ml青霉素+ 100μg/ml链霉素的培养体系对北京油鸡脂肪干细胞进行体外培养时,获得的效果最佳。2.北京油鸡脂肪干细胞在体外具有较强的自我更新能力。体外培养的北京油鸡脂肪干细胞呈长梭形。原代培养时细胞较混杂,经3～4次传代后细胞即可被纯化。细胞的生长曲线呈“S”形,经历了潜伏期、对数生长期和平台期。细胞的群体倍增时间约为35 h。北京油鸡脂肪干细胞在体外可传至第15代。10代内的细胞形态及增殖能力较稳定,从第12代开始,细胞内出现空泡,到第15代时表现出典型的凋亡形态,无法继续培养。3.对体外培养的脂肪干细胞进行冻存与复苏试验,结果发现P 1、P 3代细胞冻存前后的活率无显著性差异(P > 0.05),而P 5与P 7代细胞的活率在冻存前后则出现了显著差异(0.01 < P < 0.05)。提示对细胞进行冻存时需考虑细胞代次,且冻存液的配比还需进一步研究。4.利用免疫荧光染色及RT-PCR方法对体外培养的细胞进行表面标记检测。结果表明北京油鸡脂肪干细胞表达CD29、CD44、CD71和CD73这几种间充质干细胞普遍表达的标记物,而不表达内皮细胞特异性标记物CD31。符合脂肪干细胞的特性。5.体外培养的北京油鸡脂肪干细胞具有多向分化潜能,在适宜的诱导因子及诱导时间的作用下,北京油鸡脂肪干细胞不但能够纵向分化为中胚层的成骨细胞、脂肪细胞和心肌细胞,而且能够跨胚层横向分化为神经细胞。综上所述,北京油鸡脂肪干细胞在体外具有较强的自我更新能力及可塑性,并且鉴于其取材简单、获得量大、副作用小等特点,可作为种子细胞进行濒危物种的保存,并为日后利用脂肪干细胞进行临床治疗提供一定的参考,同时也可为北京油鸡风味基因的改良提供模型。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-12
第一章 引言  12-19
  1.1 脂肪干细胞的研究进展  12-16
    1.1.1 脂肪干细胞的发现与命名  12-13
    1.1.2 ADSCs 的分离  13
    1.1.3 ADSCs 的生物学特性  13-16
  1.2 脂肪干细胞在组织工程学研究中的应用前景  16-18
  1.3 本研究的目的意义  18-19
第二章 北京油鸡脂肪干细胞的分离、培养与鉴定  19-34
  2.1 试验材料  19-21
    2.1.1 试验对象  19
    2.1.2 试验主要仪器设备  19
    2.1.3 试验主要试剂及配制  19-21
  2.2 试验方法  21-26
    2.2.1 北京油鸡 ADSCs 的分离  21
    2.2.2 北京油鸡 ADSCs 培养体系的优化  21
    2.2.3 北京油鸡 ADSCs 的传代  21-22
    2.2.4 北京油鸡 ADSCs 的冻存与复苏  22
    2.2.5 北京油鸡 ADSCs 表面标记的检测  22-25
    2.2.6 北京油鸡 ADSCs 生长曲线的绘制  25-26
  2.3 结果与分析  26-31
    2.3.1 北京油鸡 ADSCs 的分离  26
    2.3.2 北京油鸡 ADSCs 培养体系的优化  26-27
    2.3.3 北京油鸡 ADSCs 的传代  27-28
    2.3.4 北京油鸡 ADSCs 的冻存与复苏  28-29
    2.3.5 北京油鸡 ADSCs 表面标记的检测  29-30
    2.3.6 北京油鸡 ADSCs 生长曲线  30-31
  2.4 讨论  31-34
    2.4.1 北京油鸡 ADSCs 的分离与培养  31-32
    2.4.2 北京油鸡 ADSCs 的生长特性及形态特点  32
    2.4.3 北京油鸡 ADSCs 的冻存与复苏  32-33
    2.4.4 北京油鸡 ADSCs 表面标记的检测  33-34
第三章 北京油鸡脂肪干细胞诱导分化研究  34-54
  3.1 试验材料  34-36
    3.1.1 试验对象  34
    3.1.2 试验主要仪器设备  34
    3.1.3 试验主要试剂及配制  34-36
  3.2 试验方法  36-42
    3.2.1 北京油鸡 ADSCs 向成骨细胞的诱导分化及鉴定  36-38
    3.2.2 北京油鸡 ADSCs 向脂肪细胞的诱导分化及鉴定  38-39
    3.2.3 北京油鸡 ADSCs 向神经细胞的诱导分化及鉴定  39-41
    3.2.4 北京油鸡 ADSCs 向心肌细胞的诱导分化及鉴定  41-42
  3.3 结果与分析  42-51
    3.3.1 北京油鸡 ADSCs 向成骨细胞的诱导分化及鉴定  42-44
    3.3.2 北京油鸡 ADSCs 向脂肪细胞的诱导分化及鉴定  44-46
    3.3.3 北京油鸡 ADSCs 向神经细胞的诱导分化及鉴定  46-49
    3.3.4 北京油鸡 ADSCs 向心肌细胞的诱导分化及鉴定  49-51
  3.4 讨论  51-54
    3.4.1 北京油鸡 ADSCs 向成骨细胞的诱导分化  51-52
    3.4.2 北京油鸡 ADSCs 向脂肪细胞的诱导分化  52
    3.4.3 北京油鸡 ADSCs 向神经细胞的诱导分化  52-53
    3.4.4 北京油鸡 ADSCs 向心肌细胞的诱导分化  53-54
第四章 全文结论  54-56
  4.1 北京油鸡脂肪干细胞的分离、培养与鉴定  54
  4.2 北京油鸡脂肪干细胞诱导分化研究  54-56
参考文献  56-62
致谢  62-63
作者简历  63

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家禽 > 鸡
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