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Fe_3O_4纳米颗粒标记乳腺癌干细胞及对其生物学特性的影响

作　者: 刘秀宝
导　师: 陈建民
学　校: 河南科技大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 乳腺癌干细胞 分离培养 Fe3O4纳米颗粒 标记
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 41次
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内容摘要


目的:本实验采用MMTV-ErbB-2转基因小鼠的乳腺癌组织,通过分离、培养和鉴定获取小鼠乳腺癌干细胞（BCSCs）,Fe3O4纳米颗粒作为细胞活体示踪的分子影像标记剂来标记小鼠BCSCs,探讨BCSCs生物学特性。方法:MMTV-ErbB-2转基因小鼠乳腺癌组织通过酶消化、贴壁培养法获取乳腺癌细胞（BrCCs）,流式细胞仪（FCM）检测细胞膜表面标志物CD44、CD24,筛选获取CD44+CD24-/low的乳腺癌干细胞。5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L浓度的Fe3O4纳米颗粒标记对数生长期乳腺癌干细胞,普鲁士蓝染色检测各组细胞的标记率,MTT法检测各组细胞活性,探讨安全的Fe3O4纳米颗粒细胞标记浓度,同时进行小鼠活体移植、存活的评估,探讨标记后BCSCs的生物学特性。结果:MMTV-ErbB-2转基因小鼠乳腺癌组织经原代培养获取的细胞经多次传代后获得形态均一的乳腺癌细胞; FCM检测原代细胞中CD44+CD24-/low细胞占总数的2.2%±0.2%,多次传代培养后其细胞数逐渐上升并稳定在80%±2%。不同浓度的Fe3O4纳米颗粒标记BCSCs,MTT法检测显示5mg/L,10mg/L和20 mg/L Fe3O4纳米颗粒标记的细胞活性大于80%,40mg/L和80mg/L Fe3O4纳米颗粒标记的细胞活性小于80%。普鲁士蓝染色结果显示10mg/L,20mg/L和40mg/L时普鲁士蓝染色示细胞标记率约为20%,90%和100%;安全浓度的Fe3O4纳米颗粒标记的BCSCs,传代后Fe3O4纳米颗粒可递呈子代细胞;小鼠皮下种植标记BCSCs可形成新生肿瘤,HE染色病理证实为乳腺癌,普鲁士蓝染色可见乳腺癌组织中有蓝染颗粒存在。结论:从MMTV-ERBb-2转基因小鼠乳腺癌组织可成功提取表达CD44+ CD24-/low的BCSCs。20mg/L浓度的Fe3O4纳米颗粒是标记BCSCs的最佳生物安全浓度,并且移植后仍具有致瘤性。

全文目录


摘要  2-3
ABSTRACT  3-8
第1章 综述  8-19
  1.1 乳腺癌干细胞的起源  8
  1.2 乳腺癌干细胞  8-9
  1.3 乳腺癌干细胞膜标志物  9-12
    1.3.1 ABCG2  9
    1.3.2 CD24  9-10
    1.3.3 CD44  10
    1.3.4 乙醛脱氢酶-1  10-11
    1.3.5 雌激素受体  11
    1.3.6 上皮细胞特异性抗原  11
    1.3.7 趋化因子受体-4  11
    1.3.8 CD29  11-12
    1.3.9 CD49  12
  1.4 乳腺癌癌干细胞的信号通路  12-14
    1.4.1 经典Wnt 信号途径  12
    1.4.2 Notch 信号途径  12-13
    1.4.3 Hedgehog（Hh）信号途径  13
    1.4.4 TGF-β信号途径  13
    1.4.5 VEGF 信号途径  13-14
    1.4.6 EGFR 信号途径  14
  1.5 乳腺癌干细胞的分选  14-15
    1.5.1 SP 细胞分选法  14-15
    1.5.2 CD44~+CD24~(-/low)ESA~+lin~-表型  15
    1.5.3 乙醛脱氢酶-1  15
    1.5.4 乳腺癌细胞球培养  15
  1.6 BCSCs 与乳腺癌治疗  15-18
    1.6.1 BCSCs 对放疗的抵抗  15-16
    1.6.2 BCSCs 对化疗的抵抗  16
    1.6.3 针对BCSCs 的靶向治疗  16-18
  1.7 BCSCs 研究的问题与前景  18-19
第2章 前言  19-21
第3章 实验材料与方法  21-29
  3.1 实验材料  21-22
    3.1.1 实验动物  21
    3.1.2 实验试剂  21
    3.1.3 实验仪器  21-22
  3.2 主要试剂配制  22-24
    3.2.1 PBS 液配制  22
    3.2.2 DMEM/F12 培养基配制  22-23
    3.2.3 0.25%胰酶的配制  23
    3.2.4 胶原酶配制  23
    3.2.5 MTT 液的配制  23
    3.2.6 普鲁士蓝液配制  23
    3.2.7 HE 染液配制  23-24
  3.3 实验方法  24-29
    3.3.1 原代细胞培养  24
    3.3.2 细胞的传代培养  24-25
    3.3.3 乳腺癌干细胞的分选  25
    3.3.4 细胞冻存  25
    3.3.5 细胞复苏  25-26
    3.3.6 细胞计数  26
    3.3.7 细胞生长曲线  26
    3.3.8 细胞移植实验  26
    3.3.9 Fe_30_4 纳米颗粒对乳腺癌干细胞的影响  26-27
    3.3.10 MTT 法测定细胞活性  27
    3.3.11 细胞爬片普鲁士蓝染色  27
    3.3.12 乳腺癌干细胞标记后移植  27-28
    3.3.13 组织HE 染色步骤  28
    3.3.14 组织切片普鲁士蓝染色  28
    3.3.15 统计学处理  28-29
第4章 结果  29-32
  4.1 原代细胞生长情况  29
  4.2 CD44~+CD24~(-/low) 细胞的分离  29
  4.3 细胞生长情况  29
  4.4 细胞致瘤性  29-30
  4.5 MTT 检测结果  30
  4.6 普鲁士蓝染色结果  30
  4.7 乳腺癌干细胞标记后移植  30-32
第5章 讨论  32-36
第6章 结论  36-37
参考文献  37-47
附录A 附录图表  47-52
致谢  52-53
攻读硕士学位期间的研究成果  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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