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海带多糖的分离纯化、结构鉴定及生物活性研究

作　者: 曹刚
导　师: 周义发
学　校: 东北师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 海带 多糖 多糖结构分析 淋巴细胞增殖 结肠癌细胞生长 细胞迁移
分类号: Q946
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 371次
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内容摘要


海带是一种分布较广、营养价值较高的食用藻类。海带多糖有很好的生物活性,对人类健康很有益处。文献中对海带多糖的研究大多集中在硫酸化的岩藻聚糖上,对海带多糖的系统分级,特别是对褐藻胶的分离提取、结构鉴定和活性研究报道较少。为了探讨海带多糖活性和机理,更好地应用海带及其多糖,本文对海带多糖的分离、纯化,及各级分的结构特征与生物活性进行了系统的研究。海带经过水提、醇沉后得到两种多糖,20%醇沉得到的沉淀LFA和60%醇沉得到的沉淀LFF。LFA再经过酸分级得到两种多糖,分别是PH为2.85时的沉淀LFAG和上清LFAM,LFAG和LFAM分别经Sepharose CL-6B凝胶过滤层析制备得到多糖LFAGS和LFAMS;LFF通过DEAE-Cellulose离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶过滤层析制备后得到多糖LFF-1S。本论文对这三种纯化后的多糖分别进行了理化性质的研究和结构分析,其结果如下:LFAGS为白色粉末,微溶于水,分子量约为42 KDa,由GulA、ManA和GalA三种单糖组成,以1, 4-β-GulAp-1, 4-β-ManAp为主链,每四个ManA连有一个GulA,无分支,主链中有微量的β-1, 4-GalAp。LFAMS为白色粉末,难溶于水,分子量约为12 KDa,由GulA、ManA和GalA三种单糖组成,以1, 4-β-GulAp-1,4 -β-ManAp的重复单位为主链,ManAp的3位有分支,连有β-1, 4-GulAp糖残基或寡糖残基,支链末端为ManA。LFF-1S为白色粉末,易溶于水,单糖组成为GulA、ManA、Man、GluA、Gal和Fuc,分子量约为14 KDa。实验结果表明海带多糖LFAGS、LFAMS和LFF-1S对淋巴细胞有明显的调节作用。无ConA和LPS诱导时,LFAMS和LFF-1S可显著地增强小鼠脾混合淋巴细胞的增殖;在ConA和LPS诱导下,三种多糖级分可以显著的刺激ConA和LPS诱导T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖,表明三种级分多糖对ConA和LPS诱导的T细胞和B细胞有明显激活作用。当浓度大于100μg/ml时,三种多糖均能极显著地(p < 0.01)增强巨噬细胞的吞噬能力;此外,三种多糖也能增强巨噬细胞产生NO的能力,并且呈现出一定的浓度依赖性;海带多糖LFAGS具有抑制结肠癌细胞生长的作用,而LFAMS和LFF-1S对结肠癌细胞的生长没有明显影响。细胞迁移实验结果表明这三种多糖对L929细胞的迁移没有影响。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章 前言  10-20
  1.1 多糖的研究进展  10-16
    1.1.1 多糖的概述  10
    1.1.2 多糖的提取和分离  10-12
    1.1.3 多糖的结构研究  12-15
    1.1.4 多糖的生物活性  15-16
  1.2 海带多糖的研究进展  16-19
    1.2.1 海带简介  16-17
    1.2.2 海带多糖的研究进展  17
    1.2.3 海带多糖的提取方法  17-18
    1.2.4 海带多糖的活性研究  18-19
  1.3 论文的选题依据  19-20
第二章 海带多糖的提取  20-30
  2.1 材料  20-21
    2.1.1 试剂  20
    2.1.2 仪器  20-21
  2.2 实验方法  21-26
    2.2.1 材料处理  21
    2.2.2 热水浴提取海带粗多糖  21-22
    2.2.3 脱蛋白  22
    2.2.4 分级醇沉  22
    2.2.5 测定糖含量的方法  22-23
    2.2.6 测定糖醛酸含量的方法  23-24
    2.2.7 测定蛋白含量的方法  24
    2.2.8 测定分子量的方法  24-25
    2.2.9 测定单糖组成的方法  25-26
  2.3 实验结果  26-28
    2.3.1 糖含量标准曲线的测定  26
    2.3.2 糖醛酸含量标准曲线的测定  26-27
    2.3.3 蛋白含量标准曲线的测定  27
    2.3.4 分子量的测定  27-28
    2.3.5 单糖组成的测定  28
  2.4 小结  28-30
第三章 海带多糖的系统分级及结构分析  30-39
  3.1 材料  30-31
    3.1.1 试剂  30
    3.1.2 仪器  30-31
  3.2 对LFF 进行分级及理化性质研究  31-32
    3.2.1 LFF 进行分级  31
    3.2.2 LFF 进行DEAE-纤维素分级  31
    3.2.3 LFF-1 进行 Sepharose CL-6B 分级  31-32
  3.3 对LFA 进行分级及理化性质研究  32-38
    3.3.1 LFA 进一步分级  33
    3.3.2 对 LFAGS 的理化性质研究  33-35
    3.3.3 LFAMS 的理化性质研究  35-38
  3.4 结果  38-39
    3.4.1 LFAGS 研究结果  38
    3.4.2 LFAMS 研究结果  38-39
第四章 多糖的活性研究  39-45
  4.1 体外淋转实验  39-42
    4.1.1 对淋巴细胞增殖作用的研究  39-40
    4.1.2 对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响的研究  40-42
  4.2 MTT 法检测海带多糖各级分对两种结肠癌细胞增殖的影响  42-43
    4.2.1 原理  42
    4.2.2 方法  42
    4.2.3 实验结果与讨论  42-43
  4.3 划痕实验检测不同的海带多糖对L929 细胞迁移的影响  43-45
    4.3.1 实验过程  43-44
    4.3.2 实验结果与讨论  44-45
结论  45-47
参考文献  47-53
致谢  53

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物生物化学
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