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CXCR4表达在小儿神经母细胞瘤器官特异性转移中的作用及其机制研究

作　者: 陈鑫
导　师: 董蒨
学　校: 青岛大学
专　业: 小儿外科学
关键词: CXCR4 趋化因子神经母细胞瘤肿瘤转移细胞株小干扰RNA
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：建立同一病人神经母细胞瘤(NB, neuroblastoma)细胞系来源的不同侵袭能力的细胞株,探讨趋化因子受体CXCR4(趋化因子受体4)的表达水平对神经母细胞瘤细胞株体外侵袭能力的影响。方法：建立同一病人神经母细胞瘤(NB, neuroblastoma)细胞系来源的不同侵袭能力的细胞株,探讨趋化因子受体CXCR4(趋化因子受体4)的表达水平对神经母细胞瘤细胞株体外侵袭能力的影响。结果：成功建立了同一病人神经母细胞瘤(NB, neuroblastoma)细胞系来源的不同侵袭能力的细胞株,CXCR4蛋白在筛选出的细胞株QDDQ-NM a中的表达明显高于细胞株QDDQ-NM e, P<0.01;CXCR4 mRNA在QDDQ-NM a中的表达明显高于细胞株QDDQ-NM e, P<0.01。QDDQ-NM a的体外趋化侵袭能力强于QDDQ-NM e,差异具有显著性统计学意义,P<0.01,其与CXCR4蛋白和CXCR4 mRNA表达水平呈正相关。结论：同一病人神经母细胞瘤细胞系中的细胞具有异质性,同一病人神经母细胞瘤细胞系来源的不同细胞株侵袭能力不同,神经母细胞瘤细胞株高度的体外侵袭能力与CXCR4的高表达呈高度相关性。目的：构建趋化因子受体4(CXCR4)小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,研究其对体外神经母细胞瘤侵袭能力的影响。方法：选择CXCR4高表达的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系,设计合成人CXCR4基因不同靶点的能编码siRNA的3条双链DNA序列,克隆到真核表达载体pSilencerTM neo中构建siRNA表达载体,体外脂质体介导转染SH-SY5Y细胞,用半定量RT-PCR分析CXCR4基因mRNA的变化,用免疫组织化学和Western blot分析CXCR4蛋白表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果：成功构建了CXCR4-siRNA表达载体,转染后半定量RT-PCR检测神经母细胞瘤细胞CXCR4mRNA丰度分别为siRl转染组0.32±0.09、siR2转染组0.35±0.13和siR3转染组0.33±0.11,相对于对照组0.58±0.13表达下降(P<0.05)；转染后免疫组化检测神经母细胞瘤细胞CXCR4的蛋白表达分别为siRl转染组75.98±4.81、siR2转染组75.52±3.95和siR3转染组76.35±6.51,相对于对照组92.196±3.89表达下降(P<0.01)；转染后Western blot检测神经母细胞瘤细胞CXCR4的蛋白表达分别为siR1转染组0.1103±0.0023、siR2转染组0.1203±0.0015和siR3转染组0.1308±0.0018,相对于对照组0.4832±0.0012表达下降(P<0.01)；且转染后神经母细胞瘤细胞侵袭能力较对照组53.11±3.72降低(P<0.05),siRl转染组为25.48±2.81、siR2转染组为30.89±2.77、siR3转染组为18.83±1.79。结论：CXCR4-siRNA表达载体通过降低CXCR4基因的蛋白表达能显著抑制神经母细胞瘤细胞的体外侵袭能力,有望为神经母细胞瘤的基因治疗开辟新途径。

全文目录

第一部分同一病人神经母细胞瘤细胞系来源的不同侵袭能力细胞株的建立及其侵袭能力差异的研究  2-23
  中文摘要  2-3
  英文摘要  3-5
  前言  5-7
  材料与方法  7-11
  结果  11-18
  讨论  18-20
  结论  20-21
  参考文献  21-23
第二部分 CXCR4基因沉默对神经母细胞瘤体外侵袭能力的影响  23-39
  中文摘要  23-24
  英文摘要  24-25
  前言  25-27
  材料和试剂  27-28
  研究方法  28-32
  结果  32-35
  讨论  35-37
  结论  37-38
  参考文献  38-39
综述  39-45
  参考文献  43-45
攻读学位期间的研究成果  45-46
致谢  46-48
附发表文章  48-62

CXCR4表达在小儿神经母细胞瘤器官特异性转移中的作用及其机制研究

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