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microRNA-451对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

作　者: 付极
导　师: 赵玉沛
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 胰腺癌 microRNA 吉西他滨化疗敏感性
分类号: R735.9
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

背景胰腺癌是一种预后极差的消化系统恶性肿瘤,大部分患者就诊时已属于晚期,仅15%患者能行手术治疗,但5年生存率低于10%。最近几年,虽进行了大量胰腺癌放疗和化疗的研究,但是总体治疗效果不理想,其一线治疗药吉西他滨总体有效率约20%,目前面临着耐药率高等问题。因此,胰腺癌耐药仍是目前国内外研究的难点和热点。microRNA是一类长度为21-25nt的单链非编码RNA。microRNA以干扰mRNA翻译的方式调控蛋白表达。近年来一系列研究发现其在肿瘤的发生、发展过程中起到广泛的作用。在乳腺癌,非小细胞肺癌,结直肠癌中,microRNA-451都通过不同方式调节肿瘤对于不同药物的化疗敏感性。本实验室前期研究发现microRNA-451的水平,在胰腺癌耐药株和亲本株中有差异。本实验在前期研究的基础之上,进一步研究microRNA-451在胰腺癌细胞株中对化疗敏感性的影响和机制。研究目的1、证实microRNA-451在胰腺癌亲本细胞株和耐药细胞株中的表达差异；2、通过外源干预microRNA-451在胰腺癌细胞株中的表达,检测胰腺癌细胞对吉西他滨化疗敏感性的改变；3、探索microRNA-451调控胰腺癌细胞株对吉西他滨化疗敏感性的机制。方法1、通过实时荧光定量PCR检测SW1990亲本株和吉西他滨耐药株间microRNA-451的表达差异；2、应用Lipofectamine2000瞬时转染胰腺癌细胞株SW1990和MIA-PaCa2,CCK-8法检测细胞在不同浓度吉西他滨处理下的抑制率,对比转染组和对照组的化疗敏感性；3、应用Annexin V/PI双染法、Caspase-3活性检测和Western Blot检测转染microRNA-451后,吉西他滨诱导胰腺癌细胞的凋亡水平及机制。结果1、microRNA-451在SW1990吉西他滨耐药株中的平均表达水平为亲本株水平的0.223倍(P=0.006)：2、在SW1990和MIA-PaCa2细胞系中提高microRNA-451水平可以提高胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性(P<0.05),降低microRNA-451水平可以降低胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性(P<0.05)；3、(1)Annexin V/PI双染发现,在SW1990和MIA-PaCa2细胞系中,转染microRNA-451类似物后吉西他滨诱导的细胞凋亡明显增加(P<0.05),转染抑制物后吉西他滨诱导的细胞凋亡明显降低(P<0.05)；(2)Caspase-3活性检测发现转染microRNA-451类似物后细胞Caspase-3活性明显高于转染类似物对照组,转染抑制物后细胞Caspase-3活性明显降低；(3)Western Blot检测细胞凋亡通路中的相关蛋白发现,Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9的水平在转染microRNA-451类似物后升高,转染抑制物组后降低。结论1、microRNA-451在SW1990吉西他滨耐药株中的水平低于SW1990亲本株,结果具有显著性差异；2、上调胰腺癌细胞内microRNA-451水平,可以提高胰腺癌细胞对吉西他滨化疗敏感性。下调microRNA-451水平可以降低胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性；3、microRNA-451通过促进吉西他滨诱导的细胞凋亡,提高胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性。

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-11
第一部分 microRNA-451在胰腺癌细胞株SW1990亲本株及吉西他滨耐药株中表达差异的验证  11-22
  摘要  11-12
  材料和方法  12-18
  实验结果  18-20
  讨论  20-22
第二部分 microRNA-451对胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响  22-36
  摘要  22-24
  材料和方法  24-28
  实验结果  28-34
  讨论  34-36
第三部分 microRNA-451对吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的影响及机制  36-56
  摘要  36-38
  材料和方法  38-47
  实验结果  47-54
  讨论  54-56
参考文献  56-58
综述  58-67
  参考文献  64-67
致谢  67

microRNA-451对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

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