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miR-150调控c-Myb和MUC4的表达在胰腺癌发病中的作用及机制研究

作　者: 杨珂
导　师: 郑建明
学　校: 第二军医大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 胰腺癌微小RNA miR-150 抑癌基因
分类号: R735.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究背景及目的：胰腺癌（Pancreatic Cancer, PC)是一种恶性程度很高的肿瘤，其发病率在国内外均呈上升趋势。因其解剖位置特殊，发现相对较晚，且侵袭性强、恶性程度高、手术切除率低、易产生化疗耐药性，故预后差，死亡率极高。因此，了解胰腺癌发生发展的机制，寻找新的早期诊断方法和有效治疗手段是目前的当务之急。随着miRNAs的发现，作为一类在转录后基因调控中发挥功能的非编码小RNAs，由于它强大且广泛的调控作用，已成为生物学研究领域的热点之一。目前研究认为，miRNAs可通过类似癌基因、抑癌基因或其他方式调控肿瘤的发生、发展和转归过程。肿瘤细胞与正常组织细胞miRNA表达谱具有明显差异，且多数miRNA基因都位于肿瘤形成相关的脆弱基因位点，miRNA基因高频率地出现在这些与肿瘤密切相关的易变基因组中，提示miRNA在肿瘤形成过程中可能扮演着重要的角色。近年研究显示，miR-150在多种肿瘤中存在异常表达，既有上调发挥癌基因作用的报道，也有下调发挥抑癌基因作用的报道。研究发现，miR-150在胃癌、骨肉瘤、结直肠癌伴肝转移、成釉质型颅咽管瘤、肝母细胞瘤、慢性淋巴细胞性白血病、眼结膜黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等肿瘤中均存在高表达，充当癌基因的作用。而在其他一些肿瘤，包括套细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、结直肠癌、儿童急性淋巴母细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、NK/T细胞淋巴瘤等组织中低表达，充当抑癌基因的功能。为何在不同肿瘤中会出现这种截然相反的结果，目前尚不清楚。分析其作用机制，现已证实的miR-150的作用靶点有核转录因子c-Myb、4型黏蛋白(mucin4, MUC4)、早期生长应答因子2(early growth response factor2, EGR2)、角化不良蛋白1(dyskerin1,DKC1)和蛋白激酶B2(protein kinase B2, PKB2)等,其中，c-Myb是miR-150相对明确的一个进化保守的作用靶点，乳腺癌细胞和白血病细胞中miR-150的异常表达在信使RNA(mRNA)和蛋白水平上均可抑制内生性的c-Myb，在一些白血病细胞系、原发性白血病细胞和正常淋巴细胞中miR-150的表达水平均与c-Myb呈相反的关系。Zhang等也证实miR-150与c-Myb mRNA的3TJTR相互作用，miR-150的过表达可下调c-Myb的蛋白水平，并且可导致细胞周期调节因子cyclinDl和细胞生成调节因子Bcl-2的减少。另有研究显示，在肿瘤组织中miR-150表达与MUC4的表达呈负相关性。我们前期的预实验也证实c-Myb、MUC4和miR-150的表达在胰腺癌及癌旁组织中均存在明显差异。由此我们初步推断在胰腺癌中miR-150可能通过作用于c-Myb和MUC4这两种革E蛋白来发挥调节作用。对于miR-150与胰腺癌之间关系的研究目前国内外均鲜有报道。因此本研究旨在探讨miR-150在胰腺癌组织中的表达及意义，并研究其调控c-Myb和MUC4的表达在胰腺癌发病中的作用及其与胰腺癌临床病理指标及预后间的相关性。材料与方法：1.分别采用原位杂交和免疫组织化学方法检测106例胰腺癌组织芯片中miR-150及其靶蛋白c-Myb和MUC4在胰腺癌及癌旁组织中的表达，并分析它们间的相互关系，以及与胰腺癌临床病理学指标和预后间的相关性；2.应用miR-150慢病毒载体并感染胰腺癌细胞株，通过测定细胞生长、平板克隆、细胞凋亡、细胞周期和侵袭迁移等实验探讨miR-150对胰腺癌细胞生物学行为的影响；3.采用裸鼠皮下成瘤实验进一步探讨miR-150过表达对胰腺癌生物学行为的影响，并分析其在胰腺癌发生、发展中的作用及其机制。结果：1.miR-150在胰腺癌组织中较癌旁表达降低，c-Myb和MUC4则在癌组织中较癌旁组织中表达升高；miR-150、c-Myb和MUC4的表达与胰腺癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯和远处转移等临床病理学指标间没有显著的相关性；但miR-150高表达的胰腺癌患者的生存期较低表达者长，两者差异具有统计学意义，而c-Myb和MUC4低表达的胰腺癌患者的生存期较高表达者有延长的趋势；2.细胞学实验结果显示，miR-150过表达可抑制胰腺癌细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移，促进细胞凋亡，并且影响细胞周期的改变，使细胞阻滞于G1期；在胰腺癌细胞中miR-150的表达量与c-Myb和MUC4呈负相关：升高胰腺癌细胞中miR-150的表达量时，c-Myb和MUC4的表达量均降低，相反，降低胰腺癌细胞中miR-150的表达量时，c-Myb和MUC4的表达量相应升高；3.高表达miR-150，能抑制胰腺癌细胞株在裸鼠体内成瘤，相反，抑制miR-150表达后，胰腺癌细胞株在裸鼠体内的成瘤能力明显高于对照组;上述成瘤组织中c-Myb和MUC4的表达与miR-150呈负性相关。结论：1.miR-150在胰腺导管腺癌组织中表达明显低于癌旁组织，提示其在胰腺癌发生发展中可能起负性调节作用；2.细胞学和动物实验结果均显示，miR-150对胰腺癌细胞增殖、克隆形成、侵袭和凋亡等生物学行为起明显的抑制作用，提示其可能作为抑癌基因发挥作用；3.在胰腺癌中miR-150作用的靶蛋白是c-Myb和MUC4，miR-150是通过抑制c-Myb和MUC4的表达发挥其调节作用的；4.临床大样本胰腺癌病例验证显示，miR-150的表达与胰腺癌患者的预后有相关性；5.miR-150及其作用靶点c-Myb、MUC4可作为胰腺癌诊断和治疗的新的分子靶标。

miR-150调控c-Myb和MUC4的表达在胰腺癌发病中的作用及机制研究

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