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巨噬细胞再极化-抑制小鼠MFC胃癌的实验研究

作　者: 刘灏
导　师: 吴小翎
学　校: 重庆医科大学
专　业: 内科学
关键词: 巨噬细胞功能表型再极化抑制 MFC胃癌生长
分类号: R735.2
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景巨噬细胞是功能可塑细胞。根据巨噬细胞活化后的不同表型，巨噬细胞被分为1型巨噬细胞（M1）和2型巨噬细胞（M2）。M1高分泌IL-12及TNF-α、低分泌IL-10，高表达一氧化氮酶（iNOS）和CCL2且低表达精氨酸酶（Arg）、发现于炎性区域的物质1（found ininflammatory zone1, Fizz1）及CCL22，触发Th1型反应，呈现抗肿瘤的功能活性；M2则高分泌IL-10、低分泌IL-12及TNF-α，高表达Arg、Fizz1及CCL22且低表达iNOS和CCL2，触发Th2型反应，表现出促肿瘤的功能活性。M1和M2的诱导因素能相互抑制对方产生相应的因子。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）作为M2的一个亚型，也表现出M2的功能特点。M1和M2，作为被彻底极化的1型和2型细胞，是活化巨噬细胞的两个对立的极端状态；生物体内的巨噬细胞，在功能活性上，都介于M1和M2之间，或多或少地具有M1或M2的功能活性。目的基于M1和M2的不同功能特征，我们提出再极化巨噬细胞功能表型，使促肿瘤的M2和TAMs逆转为抗肿瘤M1功能，进而抗肿瘤。本研究就是检验这个假设，为通过极化巨噬细胞的功能表型来治疗胃癌打下基础。方法1.分别提取正常小鼠（6-8周龄）、衰老小鼠（20周龄）及MFC胃癌细胞负荷小鼠的腹腔巨噬细胞(PM、Aged-PM、TPM)，并做流式细胞学检测F4/80。2.用IFN-γ+LPS刺激诱导PM生成M1，单独IL-4刺激诱导PM生成M2；用IFN-γ、IL-12、IL-4和小鼠MFC胃癌细胞培养上清液（MFCS）在体外单独或交替处理上述小鼠腹腔巨噬细胞，再用LPS刺激。收集培养上清液和刺激后的细胞。3. ELISA检测培养上清液IL-10、IL-12p70和TNF-α含量，RT-PCR和qRT-PCR检测刺激后的细胞iNOS、Arg-1、Fizz1、CCL22和CCL3基因活性，观察其功能表型变化。4.对比观察1或2型功能表型的各种巨噬细胞对MFC胃癌细胞在小鼠体内成瘤性的影响。结果1. M1（IFN-γ+LPS刺激）高分泌IL-12p70和TNF-α，低分泌IL-10，显示1型功能表型；M2（单独IL-4刺激）低分泌IL-12p70和TNF-α，高分泌IL-10，显示2型功能表型。2. IFN-γ、IL-12及IL-4预处理后，再用LPS刺激，PM高分泌IL-12p70及TNF-α和低分泌IL-10，显示1型功能表型；MFCS预处理后，在用LPS刺激，PM则低分泌IL-12p70及TNF-α和高分泌IL-10，显示2型功能表型。3. IFN-γ→IL-4→LPS、IL-4→IFN-γ→LPS、IL-4→IL-12→LPS、MFCS→IFN-γ→LPS、MFCS→IL-12→LPS处理模式，诱导PM高分泌IL-12p70和TNF-α，低分泌IL-10，显示1型功能表型；IFN-γ→MFCS→LPS和IL-12→MFCS→LPS处理模式，诱导PM低分泌IL-12p70和TNF-α，高分泌IL-10，显示2型功能表型。4. LPS直接刺激，TPM及Aged-PM低分泌IL-12p70和TNF-α，高分泌IL-10，显示2型功能表型；IFN-γ预处理后再用LPS刺激，则高分泌IL-12p70和TNF-α，低分泌IL-10，显示1型功能表型。5.1型因素IFN-γ和IL-12诱导TPM和M2高分泌IL-12p70和TNF-α，低分泌IL-10，显示1型功能表型；2型因素MFCS诱导1型因素处理后的TPM和M2低分泌IL-12p70、TNF-α，高分泌IL-10，显示2型功能表型。6. M1高表达iNOS基因和CCL3基因，低表达Arg基因、CCL22基因和Fizz1基因；M2低表达iNOS基因和CCL3基因，高表达Arg基因、CCL22基因和Fizz1基因；1型因素IL-12和IFN-γ诱导处理后的TPM（IL-12-TPM、IFN-γ-TPM）和M2，高表达iNOS基因和CCL3基因，低表达Arg基因、CCL22基因和Fizz1基因，显示1型功能表型；2型因素MFCS诱导1型因素处理后的TPM、M2、IL-12-TPM和IFN-γ-TPM低表达iNOS基因和CCL3基因，高表达Arg基因、CCL22基因和Fizz1基因，显示2型功能表型；7. MFC+1型功能表型（M1和IL-12-TPM）组，出瘤时间明显晚于MFC+2型功能表型（M2、MFCS-IL-12-TPM）组、MFC+PM组和单纯MFC组，接种4周后肿瘤大小和重量也明显降低；MFC+2型功能表型（M2、MFCS-IL-12-TPM）组出瘤时间早于单纯MFC组和MFC+PM组，接种4周后肿瘤大小和重量也明显增高。结论1.不同的微环境导致不同的巨噬细胞功能表型。2.体外已经活化的巨噬细胞，能随微环境变化，再次适应性地改变自身功能表型。3.体内长期稳定地建立自身功能表型的巨噬细胞，也有此特性。4.1型因素（IL-12和IFN-γ）能颠覆2型功能表型的巨噬细胞，使之呈现出抗肿瘤的1型功能表型；而2型因素（MFCS）能颠覆1型功能表型的巨噬细胞，使之呈现出促肿瘤的2型功能表型。5在体内成瘤实验中，M1和1型因素IL-12极化的TPM抑制MFC胃癌肿块生长，而M2和2型因素MFCS极化的1型功能表型的巨噬细胞则促进MFC胃癌肿块生长。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
摘要  7-11
ABSTRACT  11-14
前言  14-16
1 材料与方法  16-29
2 结果  29-56
3 讨论  56-62
4 小结  62-63
参考文献  63-67
文献综述  67-81
  参考文献  74-81
致谢  81-82
攻读博士学位期间发表的学术论文  82-83

巨噬细胞再极化-抑制小鼠MFC胃癌的实验研究

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