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CCK-8S对野生型小鼠和AD模型小鼠的突触发育的影响及作用机制

作　者: 张露露
导　师: 王钦文
学　校: 宁波大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: CCK-8S CCK-2R 阿尔茨海默氏症 海马 树突丝 树突棘
分类号: R749.16
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：1研究野生型小鼠和阿尔茨海默氏症（Alzheimer’s Disease, AD）模型小鼠的体外培养海马神经元的突触发育过程中，硫化八肽缩胆囊素（sulfated cholecystokinin octapeptide,CCK-8S）对神经元树突丝、树突棘发育的影响。2研究CCK-8S是否通过CCKⅡ型受体(Cholecystokinin-2type receptors, CCK-2R）介导的途径影响神经元突触发育。3探寻CCK-8S在海马神经元发育过程中的作用和作用机制，为阿尔茨海默病的发病机理研究提供新实验依据。方法：新生第一天AD模型（APP/PS1转基因）小鼠和野生型小鼠经PCR鉴定后，分别对其进行海马取材，体外培养神经元。从体外培养第2天（DIV1）开始，用药物进行处理，分为四组：空白对照组、CCK-8S（0.2μM）处理组、CI988（0.1μM）、CCK-8S（0.2μM）&CI988（0.1μM）共处理组，一直培养到第21天（DIV21）。选取三个时间点进行观察研究，分别为DIV7、DIV14、DIV21，每次观察前，提前24h用绿色荧光蛋白启动子腺病毒（CMV-GFP）进行转染，使神经元表达绿色荧光蛋白，以显示神经元树突丝、树突棘等形态学细节。然后通过活细胞成像方法，观察并获取DIV7、DIV14、DIV21的不同阶段的海马神经元的形态图像。对神经元形态图像用ImageJ软件进行分析处理，分析不同组间神经元的树突丝、树突棘的密度变化。结果：1在体外培养第7天（DIV7），AD模型小鼠的神经元树突丝密度较野生型小鼠显著性降低，CCK-8S(0.2μM)处理能够使神经元树突丝密度显著性增加，使野生型小鼠的树突丝密度在原有水平上显著性增加，使AD模型鼠的树突丝密度恢复到野生型小鼠的正常水平。2在DIV14、DIV21，AD模型小鼠的神经元树突丝、树突棘密度较野生型小鼠显著性降低；研究发现CCK-8S(0.2μM)处理能够使AD模型小鼠和野生型小鼠的神经元树突丝、树突棘密度显著性增加，且对AD模型鼠的作用更加显著。3研究CCK-8S（0.2μM）&CI988（0.1μM）共处理对神经元的突触发育的影响，结果发现CI988能够阻断CCK-8S增加树突丝、树突棘密度的作用，在DIV7，DIV14和DIV21三个阶段皆是如此。4CI988（0.1μM）处理对AD模型小鼠和野生型小鼠的体外培养海马神经元的树突丝、树突棘密度无显著性作用，在DIV7、DIV14、DIV21三个阶段皆是如此。结论：在神经元体突触发育过程中，AD模型小鼠的神经元树突丝、树突棘密度减少反映了APP/PS1基因的表达会使树突丝、树突棘的发育受损；而CCK-8S能够使野生型小鼠的海马神经元的树突丝、树突棘密度增加，并且CCK-8S能够使AD模型小鼠的树突丝、树突棘密度恢复野生型小鼠正常水平，说明CCK-8S能够促进神经元突触的发育； CI988作为CCK-2R拮抗剂，单独对AD模型小鼠和野生型小鼠进行处理，对不同发育阶段的神经元树突丝、树突棘的生长发育无显著影响，但CI988能够阻断CCK-8S对神经元树突丝、树突棘生长发育的促进和保护作用，说明CCK-8S促进神经元的突触发育是由CCK-2R介导的。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-10
引言  10-13
1 实验材料与方法  13-19
  1.1 实验材料  13-15
    1.1.1 腺病毒  13
    1.1.2 实验动物  13
    1.1.3 PCR 所用试剂  13
    1.1.4 凝胶电泳所用试剂  13
    1.1.5 细胞培养试剂  13-14
    1.1.6 细胞培养器材  14
    1.1.7 细胞处理药物  14
    1.1.8 常用溶液配方  14
    1.1.9 主要实验仪器  14-15
  1.2 实验方法  15-19
    1.2.1 APP/PS1 转基因小鼠鉴定繁殖与鉴定  15-16
    1.2.2 小鼠海马神经元培养  16-17
    1.2.3 体外培养海马神经元药物处理  17
    1.2.4 腺病毒转染  17
    1.2.5 激光共聚焦显微系统成像  17-18
    1.2.6 图像分析  18
    1.2.7 数据统计分析  18-19
2 结果  19-29
  2.1 新生第一天小鼠的 APP/PS1 基因鉴定  19
  2.2 CCK-8S 对 AD 模型小鼠和野生型小鼠 DIV7 神经元树突丝密度的影响  19-22
    2.2.1 同野生型小鼠相比较 AD 模型小鼠的神经元树突丝密度显著降低  19-20
    2.2.2 CCK-8S 处理引起野生型小鼠和 AD 模型小鼠的树突丝密度显著增加  20
    2.2.3 CI988 处理阻断 CCK-8S 引起野生型小鼠与 AD 模型小鼠的树突丝密度增加的作用  20-22
  2.3 CCK-8S 对野生型小鼠和 AD 模型小鼠 DIV14 的神经元树突丝、树突棘密度的影响  22-24
    2.3.1 AD 模型小鼠与野生型小鼠相比神经元树突丝、树突棘密度显著减少  22
    2.3.2 CCK-8S 引起野生型小鼠与 AD 模型小鼠的神经元树突丝、树突棘密度增加  22
    2.3.3 CI988 阻断 CCK-8S 引起的和野生型小鼠 AD 模型小鼠神经元树突丝、树突棘密度增加的作用  22-24
  2.4 CCK-8S 对野生型小鼠和 AD 模型小鼠 DIV21 的神经元树突丝、树突棘密度的影响  24-27
    2.4.1 CCK-8S 引起野生型小鼠与 AD 模型小鼠 DIV21 的神经元树突丝、树突棘密度增加  24
    2.4.2 CCK-8S 引起野生型小鼠与 AD 模型小鼠 DIV21 的神经元树突丝、树突棘密度增加  24-25
    2.4.3 CI988 阻断 CCK-8S 引起野生型小鼠和 AD 模型小鼠 DIV21 的神经元树突丝、树突棘密度增加  25-27
  2.5 CI988 对神经元突触发育的影响  27-29
3 讨论  29-32
4 结论  32-33
参考文献  33-39
在学研究成果  39-40
致谢  40

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 精神病学 > 脑器质性精神障碍 > 老年及早老性精神障碍
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