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带有HPV-16 E6/E7基因的DC疫苗对裸鼠宫颈癌的抗肿瘤作用及相关机制的研究

作　者: 符少月
导　师: 易发平
学　校: 重庆医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 树突状细胞人乳头瘤病毒16 CaSki细胞
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：观察由携带HPV-16E6/E7基因的树突状细胞(Dendritic cell,DC)疫苗免疫得到的细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)在裸鼠体内对宫颈癌的抑制作用及相关机制的研究。方法：体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(Immature DC，imDC)，将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)-16E6/E7基因的重组腺病毒感染imDC，Western blot检测E7蛋白的表达；构建裸鼠的人宫颈癌CaSki细胞移植瘤模型，应用DC疫苗诱导的BALB/c小鼠脾脏的CTL（Cytotoxic T lymphocytes）处理后，观察裸鼠肿瘤体积变化，肿瘤长出第28d后处死裸鼠，小心剥下肿瘤组织，石蜡包埋，HE染色观察各组肿瘤的细胞形态，免疫组织化学技术法检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。CCK8(Cell counting kit8)法检测经DC疫苗免疫的BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖；免疫组化法检测裸鼠脾脏组织CD4+T淋巴细胞的表达。结果：成功培养出DC并制备出DC疫苗；第28d各组裸鼠肿瘤体积pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组与对照组pAd-mock-DC-CTL-CaSki组、DC-CTL-CaSki组、CaSki组相比较，pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组裸鼠肿瘤体积最小（P<0.05）；免疫组化检测肿瘤组织中Bax蛋白的表达结果显示：pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组最高，而对照组CaSki组表达最低；免疫组化检测肿瘤组织中Bcl-2蛋白的表达结果显示：pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组最低，而对照组CaSki组表达最高。CCK8法检测经DC疫苗免疫的BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖，结果表明：pAd-E6/E7-DC组淋巴细胞OD值明显高于pAd-mock-DC组、DC组和PBS组（P<0.01）；免疫组化检测各组裸鼠脾脏组织CD4+T淋巴细胞的表达结果显示：pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组CD4+表达量最高，pAd-mock-DC-CTL-CaSki组和DC-CTL-CaSki组CD4+表达量次之，CaSki组CD4+表达量最低。结论：带有HPV-16E6/E7基因修饰的DC疫苗，能够促进小鼠体内T淋巴细胞的增殖，诱导CTL抑制裸鼠宫颈癌移植瘤的生长。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-13
  参考文献  11-13
第一部分带有 HPV-16 E6/E7 基因的 DC 疫苗对裸鼠宫颈癌的抗肿瘤作用  13-26
  1 实验材料  13-14
  2 实验方法  14-19
  3 实验结果  19-23
  4 讨论  23-26
第二部分带有 HPV-16 E6/E7 基因的 DC 疫苗对裸鼠宫颈癌抗肿瘤作用相关机制的研究  26-33
  1 实验材料  26-27
  2 实验方法  27-29
  3 实验结果  29-31
  4 讨论  31-33
参考文献  33-35
全文总结  35-36
文献综述  36-46
  参考文献  43-46
致谢  46-47
攻读硕士期间发表论文情况  47-48

带有HPV-16 E6/E7基因的DC疫苗对裸鼠宫颈癌的抗肿瘤作用及相关机制的研究

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