学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

海口地区人乳头瘤病毒HPV感染的分子流行病学调查和相关杂交检测芯片的初步研究

作　者: 翁志聪
导　师: 朱中元
学　校: 海南大学
专　业: 微生物
关键词: 人乳头瘤病毒 分子流行病学 检测分型芯片
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 20次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)属于乳多空病毒科(Papovaviridae)乳头瘤病毒属的常见致癌病毒。根据基因序列不同,大约有200多种致癌能力不同的基因亚型。本文为了研发具有海口地域性HPV基因分型检测芯片,对海口地区HPV亚型感染的分子流行病学进行调查研究,检测并分析了海南海口地区近年HPV感染的流行病学特征。根据研究情况,选用海口地区经常感染的13种亚型(其中高危型9种,低危型4种,具体见表3.2.4)设计特异性引物和探针；建立了HPV各个主要亚型小片段特异性克隆体库；制备具有海口地域性HPV反向点杂交检测分型芯片。本次检测的所有样本中,总阳性率为41.72%,受感染样本中有22.71%的受感染者感染了2种或者2种以上型别；并且在77.29%的单侵染人群中有74.78%的人受到高危型HPV的感染。各种亚型检出率从高到低分别是HPV16、58、43、52、6、33、56、11、83、18、42、68、31、59、66、35、53,分别占22.25%、17.89%、16.74%、16.06%、8.94%、8.03%、6.88%、5.96%、4.36%、4.13%、3.67%、3.44%、2.75%、2.29%、2.29%、2.06%和1.61%。30岁以下、30～40岁和40岁以上3个年龄组,比例分别为30.05%、27.06%和24.54%。前者和后两者比较均无统计学意义(X2=0.8095, P>0.05;X2=3.0571, P>0.05)。建立的13个HPV亚型的特异性小片段克隆体库中,HPV16、31和53分别有4个不同的位点与Genbank数据有差异外,别的序列都是一致的。证明所建立的克隆体库在这3个HPV亚型有变异。但是从系统发育树来看,HPV16和HPV53与他们各自比对菌株的序列都在同一个分支上,亲缘关系比较近,侧面或许能够说明他们在表型方面的变化不会很大。反之,HPV31可能会是新的亚型；当然缺乏更多的证据。检测芯片选取了12个样本进行检测分型。结果样本p11091506在医院检验科检查结果具有HPV39亚型,本文所选取13的亚型中没有此亚型,在芯片上没有杂交位点,所以用本芯片检测不到。考虑到HPV39非本地区常感染型,第一部分调查感染率只有1.15%,所以对于本检测分型芯片的影响相对较小,但是不能完全忽视。其余的杂交成功,基本成功制备了具有海口地域性HPV反向点杂交检测分型芯片。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-10
上篇 文献综述  10-21
  第一章 HPV的研究进展  10-19
    1. 引言  10-19
      1.1 HPV的DNA核心  10-11
        1.1.1 HPV的基因组  10-11
        1.1.2 HPV的不同亚型  11
      1.2 HPV与相关疾病  11-12
        1.2.1 HPV与宫颈癌  11-12
        1.2.2 HPV与尖锐湿疣  12
        1.2.3 HPV与其他癌症  12
      1.3 HPV的流行情况  12-14
        1.3.1 传播方式  12
        1.3.2 感染的普遍性  12-13
        1.3.3 国外感染情况  13
        1.3.4 国内感染情况  13-14
      1.4 HPV的检测方法  14-17
        1.4.1 细胞学和免疫学检测法  14
        1.4.2 核酸分子检测法  14-17
        1.4.3 基因芯片  17
      1.5 预防和治疗  17-18
      1.6 疫苗研究现状  18-19
  第二章 课题研究目的与意义  19-20
  第三章 技术路线  20-21
下篇 研究内容  21-46
  第一章 海口地区人乳头瘤病毒HPV感染的分子流行病学研究  21-27
    1. 材料与方法  21-22
      1.1 样本  21
      1.2 仪器及试剂  21
      1.3 实验方法  21-22
    2. 结果  22-25
      2.1 不同性别感染HPV情况  22
      2.2 不同年龄组比例  22-23
      2.3 总阳性率、多重和高危型侵染情况  23-24
      2.4 不同HPV型别检出情况  24-25
    3. 讨论  25-27
      3.1 不同性别感染HPV情况  25
      3.2 不同年龄组比例  25
      3.3 总阳性率、多重和高危型侵染情况  25-26
      3.4 不同HPV型别检出情况  26-27
  第二章 人乳头瘤病毒L1基因特异性小片段克隆体库的建立  27-38
    1. 材料与方法  27-32
      1.1 样本  27
      1.2 仪器及主要生化试剂  27-28
      1.3 引物  28
      1.4 实验方法  28-32
        1.4.1 DNA提取  28
        1.4.2 目的片段的扩增  28-30
        1.4.3 PCR产物的回收  30
        1.4.4 PCR回收产物与pMD18-T载体连接  30
        1.4.5 制备E.coli DH5α感受态细胞  30-31
        1.4.6 连接产物热激转化感受态细胞  31
        1.4.7 菌落PCR验证  31-32
    2. 结果  32-37
      2.1 通用引物扩增结果  32-33
      2.2 特异性引物扩增结果  33
      2.3 菌落PCR扩增结果  33-34
      2.4 测序结果  34-36
      2.5 系统发育树  36-37
    3. 讨论  37-38
      3.1 检测亚型的选择  37
      3.2 特异性小片段目的序列的获得  37
      3.3 测序结果的比对  37-38
  第三章 制备具有海口地域性人乳头瘤病毒反向点杂交检测分型芯片  38-46
    1. 材料与方法  38-42
      1.1 样本  38
      1.2 仪器及主要生化试剂  38-39
      1.3 各亚型特异性探针和阳性样本扩增引物  39-40
      1.4 实验方法  40-42
        1.4.1 杂交膜的制备  40
        1.4.2 目的条带的获得  40
        1.4.3 杂交  40-42
    2. 结果  42-45
      2.1 已建立克隆体库阳性样本的杂交结果  42-43
      2.2 其他未知亚型样本杂交结果  43-45
    3. 讨论  45-46
结论  46-48
  1. 本课题创新点  46-47
  2. 本课题存在的不足  47
  3. 展望  47-48
参考文献  48-51
附录  51-52
缩略语  52-53
攻读硕士期间发表或者待发表的文章  53-54
致谢  54

相似论文

  1. 利用GST-标签大肠杆菌表达系统制备HPV 58 E7蛋白,R392
  2. 河南省樱桃谷鸭乙型肝炎病毒（DHBV）分子流行病学调查及FNC抗DHBV体内试验研究,S858.32
  3. 贵州省部分少数民族妇女宫颈癌的HPV谱研究,R737.33
  4. 尖锐湿疣人乳头瘤病毒的基因分型及微卫星DNA改变,R737.33
  5. 人乳头瘤病毒检测在宫颈病变筛查和随访中的意义,R737.33
  6. 阴道镜下宫颈活检在宫颈病变诊断中的价值（附500例临床病例分析）,R737.33
  7. 人乳头瘤病毒（HPV）16/18E6感染与食管鳞癌相关性研究,R735.1
  8. 猪群中三种新发小DNA病毒的分子流行病学研究,S858.28
  9. 染色体部分区域遗传变异与江苏汉族人群乳腺癌遗传易感性的关联研究,R737.9
  10. XRCC1和SMAD4基因多态性与胃癌遗传易感性研究,R735.2
  11. 基于微流控芯片的临床基因诊断应用研究,R440
  12. 人类肠道病毒A组山东地方株的基因型分布及其所致疾病分子流行病学研究,S852.65
  13. 2010年中国鸡传染性支气管炎病毒分子流行病学分析,S858.31
  14. 生物与化学分析方法在诊断试剂标准品制备中的应用,R440
  15. 幽门螺杆菌中国菌株基因型分析,R378
  16. 四川部分地区鸡马立克病毒分子流行病学调查,S858.31
  17. 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及NSP2、ORF5基因的遗传变异分析,S858.28
  18. 子宫颈高级别鳞状上皮内病变高危因素分析,R737.33
  19. 液相芯片技术在人乳头瘤病毒基因分型检测中的应用研究,R440
  20. 2009年深圳地区杯状病毒感染的分子流行病学特征,R181.3
  21. 我国部分地区PRRSV分子流行病学分析及HN6株E蛋白的原核表达,S858.28

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com