学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

豚鼠肺脏上皮细胞形成及Toll样受体（TLR）信号因子的发育表达

作　者: 马凌洁
导　师: 刘晓明
学　校: 宁夏大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 豚鼠肺脏 TLRs 形态学上皮细胞发育表达先天免疫
分类号: R563
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 15次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

豚鼠是研究人哮喘病、结核病等呼吸道疾病的理想动物模型之一。同时,豚鼠也是研究肺脏的先天免疫机制和呼吸道疾病的致病机理的常用模型。因此,本研究对豚鼠肺脏发育过程中上皮细胞的发育及其Toll样受体(TLRs)信号表达进行了初步的研究。试验中,我们利用组织化学染色(HE)和免疫组织化学(IHC)染色方法对不同发育时期豚鼠呼吸道主要上皮细胞的类型与组成进行了形态学观察,并对TLRs信号分子的发育表达利用定量反转录PCR(qRT-PCR)和免疫印迹(WB)法进行了分析。结果显示,在胚胎(Embryonic)发育到45d和52d时,豚鼠肺脏分别处于假腺期和小管期；在胚胎发育到59d至出生前,肺脏呈现为肺泡增多的囊状期；在出生后7d至成年期(3个月),豚鼠肺脏发育处于肺泡期。IHC结果表明,在胚胎发育的第45d,肺脏存在具有多能性的基底细胞和肺泡Ⅱ型细胞,当胚胎发育到52d时,即肺脏发育的小管期,可以观察到纤毛细胞和Clara细胞。荧光定量PCR分析结果表明,在出生后3个月(成年)、28d、14d、7d利0d,以及胚胎期E45d、E52d和E59d的不同发育阶段,豚鼠肺脏中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6、TLR7、 TLR8、TLR9、TLR10、MyD88和TRAF6,这11种TLR相关信号均有表达,但在出生前,各因子的表达量相对高于出生后。其中,在胚胎期E45d、E52d和E59d的豚鼠肺脏组织中,TLR1-10总体的表达水平为显著递增趋势,E52d时,TLR4表达量最高,E45d表达量次之；在E52d和E59d时,TRAF6和MyD88相对表达量最高；而在出生后到成年(3个月)期,各因子的表达量显著降低,且出生后的不同时期,同一因子间的表达差异不显著。同时,利用蛋白免疫印迹Western Blotting技术在蛋白质水平进一步对上述因子的表达进行了验证。上述结果表明,豚鼠肺脏在发育过程中,随着上皮细胞的增殖和分化,肺脏在形态学和功能上趋于成熟。TLRs在出生前的增高现象在分子水平提示豚鼠肺脏出生前的形态功能成熟性,并具备比较完善的免疫反应能力；而出生后这些因子的表达显著降低,将有利于避免机体诱导过度的免疫反应对组织器官造成免疫损伤,并处于随时识别免疫刺激源以激活先天免疫和获得性免疫反应的状态。这些结果都为进一步探讨豚鼠肺脏上皮细胞发育生物学的特征及其先天免疫机制的形成过程等提供了理论依据。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章文献综述  11-24
  1.1 呼吸系统病理模型研究进展  11-12
  1.2 TLRs的功能及结构作用  12-15
    1.2.1 TLRs  12-15
  1.3 TLRs与呼吸道疾病  15-19
    1.3.1 TLRs与肺结核  15-16
    1.3.2 TLRs与哮喘  16-17
    1.3.3 TLRs与COPD  17-18
    1.3.4 TLRs与癌症  18-19
  1.4 TLR在肺脏发育中的表达  19-22
    1.4.1 肺形成的组织学时期  19-21
    1.4.2 肺脏发育过程中TLRs相关研究的表达  21-22
  1.5 本课题研究意义  22-24
第二章豚鼠肺脏上皮细胞的发育形成及TLR信号免疫组化分析  24-39
  引言  24
  2.1 实验材料  24-25
    2.1.1 实验样本  24
    2.1.2 主要仪器与试剂  24-25
  2.2 实验方法  25-28
    2.2.1 豚鼠肺脏组织的包埋和切片制作  25-26
    2.2.2 豚鼠不同发育时期肺脏组织HE染色  26-27
    2.2.3 免疫组织化学染色鉴定豚鼠肺脏上皮发育中的细胞类型  27-28
  2.3 实验结果与分析  28-37
    2.3.1 豚鼠不同发育时期的解剖学形态  28-30
    2.3.2 不同发育时期豚鼠肺脏组织HE染色结果与分析  30-32
    2.3.3 不同发育时期豚鼠肺脏组织免疫组织化学染色结果与分析  32-37
  2.4 讨论  37-38
  2.5 小结  38-39
第三章 TLRs在豚鼠肺脏发育过程中的表达研究  39-55
  引言  39
  3.1 实验材料  39-41
    3.1.1 实验动物  39
    3.1.2 主要仪器与试剂  39-41
  3.2 实验方法  41-47
    3.2.1 豚鼠肺脏组织的收集和处理  41
    3.2.2 豚鼠肺组织总RNA的提取  41-42
    3.2.3 豚鼠肺脏cDNA的合成  42
    3.2.4 TLR信号通路中相关信号分子的引物设计  42-43
    3.2.5 目的基因的扩增  43-44
    3.2.6 荧光定量PCR反应条件的优化  44-45
    3.2.7 不同发育时期豚鼠肺脏组织蛋白制备及相关Western Blotting检测  45-47
  3.3 实验结果及分析  47-52
    3.3.1 豚鼠肺脏总RNA的提取和目的基因片段的扩增与分析  47-48
    3.3.2 TLRs信号通路中主要信号分子在发育中的RNA水平与蛋白水平分析  48-52
  3.4 讨论  52-53
  3.5 小结  53-55
结果与结论  55-56
参考文献  56-61
附录  61-65
致谢  65-66
个人简介  66

豚鼠肺脏上皮细胞形成及Toll样受体（TLR）信号因子的发育表达

内容摘要

全文目录

相似论文