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臭牡丹有效成分的提取及其细胞保护和抗炎机制研究

作　者: 张立文
导　师: 秦晓群
学　校: 中南大学
专　业: 生物学
关键词: 臭牡丹人支气管上皮细胞 ROS LDH Catalase 5-LOX
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

哮喘是一种以气道变应性炎症及气道高反应为特征的慢性反复发作性呼吸道疾病。临床治疗主要以支气管扩张剂和抗炎剂联合治疗,虽然这些药物可以治疗或缓解气道高反应,但不能解决病情反复发作和阻断气道结构重塑与肺功能衰退进程等问题。现代医学实践证明,许多中药在体内都具有抗炎,抑菌和免疫刺激作用。臭牡丹(Clerodendrum Bungei),马鞭草科,为常用的民族药材,具有活血化瘀、清热利湿、消肿止痛、解毒等功效。近来研究发现,其提取液具有对抗迟发型超敏反应和细胞免疫的抑制作用。本研究前期研究发现,臭牡丹经萃取得到石油醚部分、氯仿部分和水部分三个部分,经过活性评价,发现氯仿部分最能减轻臭氧攻击所造成气道与肺泡病理改变,炎症反应及气道高反应。氯仿部分经硅胶柱层析得到A、B、C、 D、E和F六个活性组分,经过活性评价,活性组分B和C最能够减轻上述病理反应。活性组分B中提取的化合物1和活性组分C中提取的化合物2为相同化合物。本研究在前期研究的基础上,提取分离臭牡丹治疗气道高反应性疾病的有效单体,鉴定其化学结构,并就其药理机制等方面做进一步研究,为临床用药提供科学性和可靠性依据。目的：提取分离臭牡丹治疗气道高反应性疾病的有效单体,鉴定其化学结构,在细胞水平探讨其药理机制。方法：①对臭牡丹总提物依次用石油醚、氯仿萃取,硅胶柱层析法、聚酰胺柱层析法分离,并用高效液相色谱分析法进行提纯,最后得到有效单体。采用紫外光谱分析、红外光谱分析、H谱分析和C谱分析等光谱方法对有效单体进行结构鉴定。②MTT法检测臭牡丹有效单体对人支气管上皮细胞活力的影响。③采用不同浓度(0.1-25μg/ml)臭牡丹有效单体预处理HBECs,在03和LPS应激作用下,观察其对HBECs的ROS, LDH, Catalase,5-LOX活性的影响。结果：①紫外光谱分析、红外光谱分析、H谱分析和C谱分析等光谱方法鉴定臭牡丹有效单体为醌类化合物。②MTT法结果提示有效单体在0.1-25ug/ml浓度范围内对HBECs活力没有影响③03应激使HBECs的LDH释放和ROS增加,臭牡丹有效单体可显著降低LDH释放和ROS活性,增加Catalase活性。④臭牡丹有效单体可显著降低LPS诱导的]HBECs5-LOX表达增加。结论：臭牡丹治疗气道高反应性疾病的有效单体是醌类化合物；有效单体能够提高HBECs抗氧化、抗损伤的保护能力以及通过抑制5-LOX活性具有抗炎作用。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
缩略词表  11-12
前言  12-14
1 臭牡丹治疗气道高反应性疾病有效单体的制备和结构鉴定  14-24
  1.1 实验材料  14-15
    1.1.1 主要药物及试剂  14
    1.1.2 主要仪器设备  14-15
  1.2 实验方法  15-22
    1.2.1 臭牡丹中活性组分的分离制备  15
    1.2.2 臭牡丹有效单体的分离制备与纯化  15-16
    1.2.3 薄层色谱分析  16
    1.2.4 高效液相色谱分析  16-17
    1.2.5 臭牡丹有效单体化合物结构鉴定  17-22
  1.3 讨论  22-23
  1.4 结论  23-24
2 臭牡丹有效单体治疗气道高反应性疾病抗炎机制和细胞保护的研究  24-34
  2.1 材料和方法  24-27
    2.1.1 材料  24
    2.1.2 主要仪器设备  24-25
    2.1.3 细胞培养  25
    2.1.4 臭牡丹有效单体毒性测定(MTT法)  25-26
    2.1.5 活性氧(ROS)的检测  26
    2.1.6 乳酸脱氢酶(LDH)测定  26
    2.1.7 过氧化氢酶(Catalase)测定  26
    2.1.8 蛋白浓度的测定(BCA法)  26
    2.1.9 5-脂氧合酶(5-LOX)测定  26-27
    2.1.10 统计学处理  27
  2.2 结果  27-31
    2.2.1 臭牡丹有效单体对HBECs活力的影响  27
    2.2.2 臭牡丹有效单体对细胞内活性氧的变化  27-28
    2.2.3 臭牡丹有效单体对细胞释放LDH的变化  28-29
    2.2.4 臭牡丹有效单体对细胞内Catalase水平的变化  29-30
    2.2.5 臭牡丹有效单体对细胞在LPS刺激下5-LOX的影响  30-31
  2.3 讨论  31-33
  2.4 结论  33-34
综述  34-44
参考文献  44-49
攻读学位期间主要的研究成果  49-50
致谢  50

臭牡丹有效成分的提取及其细胞保护和抗炎机制研究

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