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费菜多糖的提取及分离纯化研究

作　者: 王娜
导　师: 王奇志
学　校: 华侨大学
专　业: 生物学
关键词: 费菜 多糖 响应面 脱蛋白 纯化
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 2次
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内容摘要


本试验以费菜为原料，研究了热水提取法、酶提取法和超声波提取法对费菜多糖（SPS）得率的影响；考察了Sevag法、酶法、三氯乙酸法和Sevag-酶法四种脱蛋白方法对费菜多糖脱蛋白效果的影响；采用DEAE-纤维素柱和凝胶柱层析法分离多糖。试验结果表明：（1）多糖提取方法中，多糖得率顺序为：热水提取法>酶提取法>超声波提取法。热水提取法最优工艺条件为：提取时间95min、料液比1:14g/mL、提取温度95℃，多糖得率为（2.08±0.22）%。超声波法提取多糖的最优工艺条件为：提取时间23min，提取温度52℃，提取功率128W，实际测得多糖得率为（0.24±0.01）%；酶法提取多糖的优化工艺条件为：pH值5.9，料液比1：20g/mL，和提取时间91min进行多糖提取，多糖得率为（0.38±0.01）%。（2）各脱蛋白方法脱蛋白效果顺序为：三氯乙酸法＞Sevag-酶结合法＞Sevag法＞酶法。Sevag法脱蛋白优化工艺条件为：振荡时间25min，氯仿：正丁醇（v/v）3:1，料液比（v/v）2:1，振荡次数4次，蛋白质脱除率和多糖损失率分别为（61.28±0.25）%和（29.16±0.19）%。酶法多糖脱蛋白工艺条件优化：反应温度为50℃，酶用量为0.5%，反应时间为90min，pH值为5.2，蛋白质脱除率为(55.65±0.41)%和多糖损失率为(35.72±0.02)%；三氯乙酸法脱蛋白最优工艺条件：三氯乙酸浓度为10%，振荡次数为4次，振荡时间为10min，蛋白质脱除率和多糖损失率分别为(82.84±0.11)%和(32.64±0.08)%；Sevag-酶结合法蛋白质脱除率为74.99%，多糖损失率为45.35%。（3）采用DEAE-纤维素柱层析得到3个多糖组分（SPS1、SPS2、SPS3），采用葡聚糖凝胶柱层析对组分SPS1进行进一步分离纯化得到2个组分（SPS1-1、SPS1-2）。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-9
第1章 引言  9-19
  1.1 费菜的主要成分  9-10
  1.2 费菜的应用研究  10-12
    1.2.1 药理学研究  10-11
    1.2.2 毒理学研究  11
    1.2.4 生物化学及分子生物学研究  11
    1.2.5 植物学研究  11-12
  1.3 多糖研究情况  12-17
    1.3.1 多糖的提取方法  12-13
    1.3.2 多糖的生物活性  13-15
    1.3.3 景天科多糖研究进展  15-17
  1.4 研究意义  17
  1.5 研究内容及主要创新点  17-19
    1.5.1 研究内容  17
    1.5.2 主要创新点  17-19
第2章 费菜多糖的提取  19-51
  2.1 材料与仪器  19-20
    2.1.1 材料  19
    2.1.2 主要试剂及来源  19-20
    2.1.3 主要仪器设备  20
  2.2 方法  20-26
    2.2.1 多糖含量测定及多糖得率计算  20
    2.2.2 费菜预处理  20-21
    2.2.3 费菜多糖热水提取法工艺优化  21-22
    2.2.4 酶法提取多糖工艺优化  22-24
    2.2.5 超声波法提取多糖工艺优化  24-25
    2.2.6 数据统计分析  25-26
  2.3 结果与分析  26-48
    2.3.1 葡萄糖标准曲线  26
    2.3.2 费菜多糖热水提取法工艺优化  26-34
    2.3.3 酶法提取费菜多糖工艺优化  34-41
    2.3.4 超声波法提取费菜多糖工艺优化  41-48
  2.4 小结  48-51
第3章 脱蛋白工艺优化  51-67
  3.1 材料与仪器  51-52
    3.1.1 材料  51
    3.1.2 主要试剂及来源  51-52
    3.1.3 主要仪器设备  52
  3.2 方法  52-56
    3.2.1 蛋白质标准曲线的绘制  52-53
    3.2.2 Sevag 法脱蛋白工艺优化  53-54
    3.2.3 酶法脱蛋白工艺优化  54-55
    3.2.4 三氯乙酸法脱蛋白工艺优化  55-56
    3.2.5 Sevag-酶结合法脱蛋白  56
    3.2.6 数据统计分析  56
  3.3 结果与分析  56-66
    3.3.1 蛋白质标准曲线  56-57
    3.3.2 Sevag 法脱蛋白工艺优化  57-60
    3.3.3 酶法脱蛋白工艺研究  60-63
    3.3.4 三氯乙酸法脱蛋白工艺优化  63-66
    3.3.5 Sevag-酶结合法脱蛋白  66
  3.4 小结  66-67
第4章 费菜多糖的分离纯化  67-71
  4.1 材料与仪器  67-68
    4.1.1 材料  67
    4.1.2 主要试剂及来源  67
    4.1.3 主要仪器设备  67-68
  4.2 方法  68-69
    4.2.1 DEAE-纤维素 52 柱层析  68
    4.2.2 葡聚糖凝胶 G-200 柱层析  68-69
    4.2.3 多糖纯度鉴定  69
  4.3 结果与分析  69-71
    4.3.1 费菜多糖 DEAE-Cellulose 色谱分离  69-70
    4.3.2 费菜多糖 Sephadex G-200 柱层析  70
    4.3.3 费菜多糖纯度鉴定  70-71
第5章 结论  71-73
  5.1 费菜多糖提取工艺探讨  71
  5.2 费菜多糖脱蛋白工艺的探讨  71
  5.3 费菜多糖的分离纯化  71-73
参考文献  73-79
致谢  79-81
个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果  81

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 有效成分的分离与提取
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