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鸡CLOCK基因在空肠弯曲杆菌感染中的表达调控及其多态性分析

作　者: 张懋志
导　师: 李显耀
学　校: 山东农业大学
专　业: 养殖
关键词: 鸡 空肠弯曲杆菌 CLOCK基因 多态性
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


CLOCK基因作为调控昼夜节律现象的核心基因之一，对维持正常的昼夜节律和机体的稳态起着关键作用。空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni, C. jejuni）是“人畜共患病”的人类食源性病原菌，世界卫生组织已将该菌列为最常见的食源性传染病源之一。为了了解CLOCK基因的多态性和鸡CLOCK基因在空肠弯曲杆菌感染中的表达调控作用，本研究从分子水平上了解鸡CLOCK基因的遗传变异和空肠弯曲杆菌感染鸡后CLOCK基因的表达以及在不同组织中CLOCK基因的表达差异。为鸡的抗病育种工作提供理论参考依据。试验选用2个商业品种（AA肉鸡、海兰褐蛋鸡）和4个山东地方品种（寿光鸡、济宁百日鸡、鲁西斗鸡、汶上芦花鸡）为试验材料，每个品种60个个体，共360个个体。利用DNA直接测序法对鸡CLOCK基因全序列进行多态性检测。结果在外显子上共检测到5处多态性位点；4处为同义突变，1处为缺失；其中位于第18外显子上的突变为新发现的突变位点。根据检测结果针对新发现的突变位点对6个群体进行基因分型，不同基因型在6个不同鸡群体间的分布存在差异。动物试验选用1日龄济宁百日鸡和白来航SPF鸡（SPF鸡）各84只为试验素材，按照品种随机将鸡分别分为两个组，试验组（28只）和对照组（56只），饲养于隔离器中。在3日龄时口服接种500μl浓度为1.0×108cfu/ml的空肠弯曲杆菌菌液，同时对照组的每只鸡口服接种等量的无菌PBS溶液。接种后的4h、8h、12h、16h、20h、24h和48h取盲肠内容物、盲肠和脾脏，测定试验动物空肠弯曲杆菌阳性率、盲肠内容物中空肠弯曲杆菌含菌量和CLOCK基因表达量。结果如下：（1）对照组空肠弯曲杆菌检测均呈阴性，济宁百日鸡试验组均呈阳性，空肠弯曲杆菌含量逐渐降低；SPF鸡试验组阳性率先下降后上升。（2）接种空肠弯曲杆菌后，试验组和对照组在4h、8h、12h、16h、20h、24h时CLOCK基因在盲肠和脾脏中的表达量差异显著或极显著（P<0.05）；48h时济宁百日鸡盲肠表达量差异不显著，SPF鸡盲肠、脾脏和济宁百日鸡脾脏表达量差异显著（P<0.05）。（3）对照组的SPF鸡和济宁百日鸡在8h和20h两个时间点时盲肠CLOCK基因表达量差异均显著（P<0.05），在12h、24h、48h三个时间点时差异均极显著（P<0.01）。试验组的SPF鸡和济宁百日鸡在8h、12h、16h三个时间点时盲肠CLOCK基因表达量差异均显著（P<0.05），在4h、24h两个时间点时盲肠CLOCK基因表达量差异均极显著（P<0.01）。（4）对照组的SPF鸡和济宁百日鸡在4h时间点时脾脏CLOCK基因表达量差异均显著（P<0.05），在8h、12h、20h、24h、48h五个时间点时CLOCK基因表达量差异均极显著（P<0.01）；试验组的SPF鸡和济宁百日鸡在4h、12h两个时间点时脾脏CLOCK基因表达量差异均显著（P<0.05），在8h、16h两个时间点时脾脏CLOCK基因表达量差异均极显著（P<0.01）。（5）CLOCK基因在盲肠组织中的表达量明显高于在脾脏组织中的表达量，两种组织中CLOCK基因表达量差异极显著（P<0.01）。以上结果表明：空肠弯曲杆菌感染对SPF鸡和济宁百日鸡CLOCK基因的表达调控影响不同，CLOCK基因在盲肠中的表达量比在脾脏中的表达量高。

全文目录


英文缩略图表  4-5
目录  5-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-11
1 前言  11-25
  1.1 空肠弯曲杆菌  11-18
    1.1.1 空肠弯曲杆菌病原学概述  11-12
    1.1.2 空肠弯曲杆菌形态特征  12
    1.1.3 空肠弯曲杆菌的培养与保存条件  12-13
    1.1.4 空肠弯曲杆菌生理生化特征  13
    1.1.5 致病因子  13-15
    1.1.6 空肠弯曲杆菌流行病学  15-18
  1.2 抗病育种  18-19
    1.2.1 抗病力  18
    1.2.2 抗病育种的方法  18-19
  1.3 CLOCK 基因  19-23
    1.3.1 CLOCK 基因概述  19-20
    1.3.2 CLOCK 蛋白的结构  20-21
    1.3.3 CLOCK 基因的功能  21-23
    1.3.4 CLOCK 基因的研究进展  23
  1.4 本研究的目的和意义  23-25
2 材料与方法  25-44
  2.1 试验材料  25-30
  2.2 试验方法  30-41
  2.3 数据处理  41-44
3 结果与分析  44-56
  3.1 混池测序结果  44-45
    3.1.1 引物检测结果  44
    3.1.2 混池测序检测结果  44-45
  3.2 基因型分析结果  45-47
    3.2.1 第 18 对引物电泳检测结果  45
    3.2.2 基因型分型测序结果  45
    3.2.3 CLOCK 基因在不同群体的遗传变异  45-47
  3.3 总 RNA 的质量检测结果  47
  3.4 动物试验结果  47-56
    3.4.1 盲肠内容物检测结果  47-49
    3.4.2 空肠弯曲杆菌感染对 CLOCK 基因表达的影响  49-54
    3.4.3 CLOCK 基因在品种内不同组织中的表达结果  54-56
4 讨论  56-60
  4.1 CLOCK 基因在山东地方鸡品种中的遗传变异  56-58
  4.2 空肠弯曲杆菌对不同鸡品种 CLOCK 基因表达的影响  58-59
  4.3 CLOCK 基因在鸡不同组织中表达的差异  59-60
5 总体结论与研究展望  60-61
  5.1 结论  60
  5.2 创新与展望  60-61
    5.2.1 课题创新  60
    5.2.2 研究展望  60-61
参考文献  61-68
致谢  68

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸡
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