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NaCI胁迫下喜树组培苗生长及生理生化特性研究

作　者: 刘慧娟
导　师: 应叶青
学　校: 浙江农林大学
专　业: 农业推广
关键词: 喜树组织培养 NaCl胁迫生理特性 DNA甲基化
分类号: S792.99
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

为了研究喜树组培苗的耐盐机理，并为耐盐株系的选择提供参考，本文在喜树组织培养的两个阶段开展组培苗的耐盐生理特性研究，并利用甲基化敏感酶MspⅠ和HapⅡ结合ISSR－PCR方法分析了不同NaCl胁迫浓度下喜树组培苗中DNA甲基化的变化情况。主要研究结果如下：（1）不定芽增殖最佳培养基为：WPM+BA0.5mg·L^-1，芽增殖系数为5.6，最长芽长为0.6cm；生根培养最佳培养基为：WPM+IBA0.5mg·L^-1，生根率为95%，最大根长为4.7cm；喜树壮苗培养的最佳培养基为改良WPM+IBA0.1mg·L^-1+ZT0.5mg·L^-1，苗高增量最大，为2.5cm，平均苗直径最长，为1.15mm。（2）在喜树组培苗不定芽增殖培养时，NaCl15mmol/L的胁迫有利于喜树组培苗的生长，表现为促进苗高增量的增加，增殖系数的提高，芽长增加；在喜树生根培养时，NaCl30mmol/L促进生根数和根长的增加。NaCl120mmol/L胁迫抑制喜树组培苗的生长，表现为抑制苗高的增加，增殖系数降低，芽长变短，生根率下降，根数和根长减少。（3）NaCl30mmol/L胁迫下喜树组培苗的SOD活性、CAT活性、可溶性蛋白和脯氨酸含量在喜树组培苗的不定芽增殖期和生根期均高于对照组。（4）NaCl胁迫使喜树组培苗叶片的相对电导率和MDA含量显著增加，且随着盐胁迫的加剧，其含量上升幅度增加。（5）NaCl胁迫使喜树组培苗叶片的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素、叶绿素a/b和叶绿素总含量下降，说明喜树组培苗的叶绿素在NaCl胁迫下受到了一定程度的破坏；但方差分析表明，NaCl30mmol/L的处理与对照组无显著差异。（6）NaCl90-105mmol/L处理的生根培养DNA甲基化程度较大，表明受NaCl胁迫较为严重；NaCl30mmol/L胁迫的甲基化程度较低，表明受盐胁迫程度较轻；且不定芽增殖培养的甲基化程度高于生根培养。（7）综合分析表明，喜树组培苗在NaCl30mmol/L的胁迫下能较好的生长，则喜树组培苗能耐NaCl30mmol/L的胁迫。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-10
前言  10-11
1 文献综述  11-17
  1.1 利用植物组培苗进行逆境生理研究的进展  11-12
    1.1.1 利用组培苗进行盐胁迫的研究进展  11-12
    1.1.2 其他  12
  1.2 喜树组织培养的研究进展  12-13
    1.2.1 喜树组织培养愈伤组织的诱导  12
    1.2.2 喜树组织培养芽的诱导  12
    1.2.3 喜树组织培养生根培养  12
    1.2.4 喜树组织培养再生体系的建立  12-13
  1.3 喜树抗性生理的研究进展  13-14
    1.3.1 pH 值胁迫  13
    1.3.2 温度胁迫  13
    1.3.3 水分胁迫  13-14
    1.3.4 盐胁迫  14
    1.3.5 Cu~(2+)胁迫  14
  1.4 植物 DNA 甲基化研究进展  14-15
  1.5 本研究的目的意义  15-17
2 材料与方法  17-25
  2.1 研究方法  17-18
    2.1.1 实验材料  17
    2.1.2 材料培育  17
      2.1.2.1 材料处理  17
      2.1.2.2 培养基与生长条件  17
    2.1.3 实验设计  17-18
      2.1.3.1 外植体污染指标  17
      2.1.3.2 腋芽增殖  17
      2.1.3.3 壮苗培养  17
      2.1.3.4 生根培养  17
      2.1.3.5 炼苗与移栽  17-18
      2.1.3.6 NaCl 胁迫  18
  2.2 测定指标及方法  18-24
    2.2.1 生长指标的测定  18
      2.2.1.1 苗高的测量  18
      2.2.1.2 芽数和根数的测定  18
      2.2.1.3 芽长和根长的测量  18
    2.2.2 生理生化指标的测定  18-21
      2.2.2.1 叶绿素含量的测定  18
      2.2.2.2 叶片保护酶活性测定  18-20
      2.2.2.3 细胞膜透性的测定  20
      2.2.2.4 游离脯氨酸含量的测定  20-21
    2.2.3 DNA 甲基化的测定  21-24
      2.2.3.1 DNA 的提取与纯化  21
      2.2.3.2 ISSR 检测  21-24
  2.3 数据处理与综合评价方法  24-25
3 结果与分析  25-45
  3.1 喜树组培苗培养基的选择  25-27
    3.1.1 不定芽增殖培养基的选择  25-26
    3.1.2 壮苗培养基的选择  26
    3.1.3 生根培养基的选择  26-27
  3.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗生长的影响  27-29
    3.2.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养的影响  27-28
      3.2.1.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养苗高增量的影响  27
      3.2.1.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖系数和芽长的影响  27-28
    3.2.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养的影响  28-29
      3.2.2.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养的生根率和苗高增量的影响  28-29
      3.2.2.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养的生根数和根长的影响20  29
  3.3 NaCl 胁迫对喜树组培苗生理生化特性的影响  29-36
    3.3.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养生理生化特性的影响  29-33
      3.3.1.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养 SOD 和 CAT 活性的影响  29-30
      3.3.1.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养 POD 活性的影响21  30-31
      3.3.1.3 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养脯氨酸含量的影响22  31-32
      3.3.1.4 NaCl 胁迫对喜树组培苗腋芽增殖培养可溶性蛋白含量的影响  32
      3.3.1.5 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养叶片相对电导率和MDA 含量的影响  32-33
    3.3.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养生理生化特性的影响  33-36
      3.3.2.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养 SOD 和 CAT 活性的影响24  33
      3.3.2.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养 POD 活性的影响  33-34
      3.3.2.3 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养脯氨酸含量的影响  34
      3.3.2.4 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养可溶性蛋白含量的影响25  34-35
      3.3.2.5 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养叶片相对电导率和 MDA 含量的影响  35-36
  3.4 NaCl 胁迫对喜树组培色素的影响  36-39
    3.4.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养叶绿素和类胡萝素含量的影响  36-38
    3.4.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养叶绿素和类胡萝素含量的影响  38-39
  3.5 NaCl 胁迫对喜树组培苗 DNA 甲基化的影响  39-45
    3.5.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗不定芽增殖培养 DNA 甲基化的影响  40-42
    3.5.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗生根培养 DNA 甲基化的影响  42-45
4 讨论  45-49
  4.1 喜树组培苗培养基的选择  45
  4.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗生长的影响  45
  4.3 NaCl 胁迫对喜树组培苗生理生化特性的影响  45-47
    4.3.1 NaCl 胁迫对喜树组培苗抗氧化系统的影响  45-46
    4.3.2 NaCl 胁迫对喜树组培苗渗透调节及渗透调节物质的影响  46-47
  4.4 NaCl 胁迫对喜树组培苗色素的影响  47-48
  4.5 NaCl 胁迫对喜树组培苗 DNA 甲基化的影响  48-49
5 结论与展望  49-51
  5.1 结论  49-50
  5.2 展望  50-51
参考文献  51-56
附图  56-61
附录  61-62
个人简介  62-63
致谢  63

NaCI胁迫下喜树组培苗生长及生理生化特性研究

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