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梨黑斑病菌拮抗细菌的筛选鉴定及其拮抗活性的初步研究

作　者: 杨晓蕾
导　师: 刘凤权
学　校: 南京农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 梨黑斑病菌生物防治枯草芽孢杆菌胞外酶上清液拮抗谱
分类号:
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

梨是我国三大水果之一。梨黑斑病是由链格孢属(Alternaria sp.)真菌引起的一种病害,是梨三大重要病害之一。目前控制梨黑斑病的主要方法仍然以化学杀菌剂为主。但化学杀菌剂存在着抗药性和农药残留等问题,对人体和环境构成威胁。因此,筛选抗菌谱广、生防活性高以及对环境安全的新型细菌,从而制备高效的生防菌剂,可作为化学防治梨黑斑病的有效补充,减少化学农药的使用,降低对环境的污染。从全国13个省市自治区的100余份梨黑斑病样品中分离得到152株梨黑斑病菌。根据培养性状的差异,可将这152株菌株分为8大类,并各选出代表性菌株进行产孢培养。其中分离自江苏丰县的菌株FX02菌落颜色为墨绿色,产孢量较多,室内接种离体叶片可引起黑斑病。因此将FX02作为供试菌株,开展梨黑斑病菌拮抗细菌的筛选工作。采用稀释平板法,从陕西乾县、安徽砀山、江苏句容等地的梨黑斑病病叶样品中分离得到613株细菌菌株,通过室内平板拮抗得到一株对梨黑斑病菌有显著抑制作用的拮抗细菌。该菌株分离自江苏句容酥梨梨黑斑病样品,命名为JR-C。通过培养性状观察、Biolog以及16S rDNA序列综合分析,将JR-C鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。胞外酶活性检测显示：该菌产生蛋白酶和纤维素酶,不产生几丁质酶和p-1,3-葡聚糖酶。此外,该菌的上清液可以抑制梨黑斑病菌菌丝的正常生长以及孢子的萌发,当上清液浓度达到20%时,可明显观察到梨黑斑病菌菌落与对照菌落相比减小92.19%;当JR-C上清液浓度为50%时对梨黑斑病原菌孢子萌发的抑制率达到78.14%。同时,上清液处理后的梨黑斑病菌菌丝越来越致密、短粗,分支也明显减少。室内测定该菌对梨轮纹病菌、梨腐烂病菌、梨炭疽病菌和稻瘟病菌等多种病原真菌均具有较好的拮抗作用,对马铃薯环腐病菌有一定的拮抗效果,但对卵菌无拮抗效果。对JR-C的脂肽类化合物进行提取和鉴定,发现该菌不产生典型的脂肽类化合物。本研究所获得的生防细菌JR-C菌株拮抗活性高,为后续利用该菌研制生防菌剂防治梨黑斑病及其他作物病害提供了技术支撑。

全文目录

目录  4-6
摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
上篇文献综述  9-26
  第一章梨黑斑病发生危害及综合防控研究现状概述  10-18
    1 梨黑斑病的发生危害  10
    2 梨黑斑病的发生规律  10-11
    3 梨黑斑病的病原研究  11-13
      3.1 病原鉴定  11
      3.2 病原毒素相关研究  11-13
    4 梨黑斑病的综合防控研究现状  13-18
      4.1 植物病害控制原理  13-14
      4.2 植物病害管理策略  14-15
      4.3 梨黑斑病的综合防控研究现状  15-18
  第二章枯草芽孢杆菌防治植物真菌病害研究现状概述  18-26
    1 枯草芽孢杆菌  18
    2 枯草芽孢杆菌生防机制  18-22
      2.1 竞争作用  19
      2.2 分泌抗菌物质  19-22
      2.3 诱导抗性  22
    3 枯草芽孢杆菌防治植物真菌病害应用现状  22-26
      3.1 国外产品应用现状  23
      3.2 国内产品应用现状  23-26
下篇研究内容  26-58
  第一章我国13个省市自治区梨黑斑病菌的分离鉴定  28-36
    摘要  28
    Abstract  28-29
    1 材料与方法  29-31
      1.1 材料  29-30
      1.2 病害症状的观察  30
      1.3 病原菌的分离纯化  30
      1.4 病原菌的分子生物学鉴定  30-31
      1.5 菌株的致病性测定  31
    2 结果与分析  31-35
      2.1 病害症状的观察  31-32
      2.2 梨黑斑病样品病原的分离及鉴定  32-34
      2.3 梨黑斑病菌菌株的致病性测定  34-35
    3 讨论  35-36
  第二章梨黑斑病菌生防细菌的筛选鉴定  36-48
    摘要  36
    Abstract  36-37
    1 材料与方法  37-40
      1.1 材料  37-38
      1.2 拮抗细菌的分离  38
      1.3 拮抗细菌拮抗活性测定  38-39
      1.4 拮抗细菌JR-C的鉴定  39-40
    2 结果与分析  40-46
      2.1 拮抗细菌的筛选  40-41
      2.2 拮抗菌JR-C的鉴定  41-42
      2.3 拮抗菌拮抗性能的测定  42-46
    3 讨论  46-48
  第三章枯草芽孢杆菌JR-C拮抗活性的初步研究  48-58
    摘要  48
    Abstract  48-49
    1 材料与方法  49-52
      1.1 材料  49-50
      1.2 JR-C胞外酶活性检测  50-51
      1.3 JR-C对抗生素耐受水平的测定  51
      1.4 JR-C代谢产物对梨黑斑病菌的拮抗性能测定  51
      1.5 JR-C脂肽类化合物的提取和初步鉴定  51-52
    2 结果与分析  52-56
      2.1 JR-C胞外酶活性检测  52-53
      2.2 JR-C对抗生素耐受水平的测定  53
      2.3 JR-C代谢产物对梨黑斑病菌菌丝及孢子萌发的拮抗能力测定  53-55
      2.4 拮抗细菌JR-C脂肽类化合物的提取和初步鉴定  55-56
    3 讨论与结论  56-58
参考文献  58-68
附录一梨黑斑病菌FX02菌株rDNA-ITS序列  68-69
附录二拮抗细菌JR-C 16S rDNA序列  69-70
附录三发表或待发表的论文  70-72
致谢  72-74
本论文研究受资助项目  74

梨黑斑病菌拮抗细菌的筛选鉴定及其拮抗活性的初步研究

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