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油菜内生拮抗细菌的筛选及对菌核病菌的抑制作用研究

作　者: 李宁
导　师: 高智谋
学　校: 安徽农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 油菜内生细菌油菜菌核病菌拮抗作用
分类号: S435.654
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

油菜菌核病是一种世界性病害,给我国的油菜生产带来严重损失。近年来,随着环境污染、生态破坏、农产品安全等问题的日益突出,传统的药剂防治己不再适用。利用生防菌对油菜菌核病进行防治成为现代研究的一个热点,其中植物内生菌在这方面的应用更为突出。因此,为寻找出生防价值较高的内生拮抗菌对油菜菌核病进行预防和控制,开展了以下试验：1油菜菌核病原菌的拮抗菌的筛选。通过抑菌圈法从油菜植株内分离、筛选到2株对油菜菌核病有较强拮抗作用的内生菌株SF3、SF4,其中SF4菌株抑菌效果最佳,且遗传稳定性良好。在平板对峙试验中,菌株SF3、SF4对核盘菌NGA4的抑制率分别为54.12%和63.53%。在显微镜下观察发现受SF4抑制的核盘菌菌丝发生内含物分布不均匀,粗细不均,扭曲,断裂等现象。2测定了内生菌SF3、SF4的无菌发酵液对核盘菌的抑菌活性。结果显示：两菌株的无菌发酵液对核盘菌均有抑制作用。SF3培养72h和SF4培养96h的无菌发酵液的抑制效果最好,对病原菌NGA4的抑制率达分别为27.52%和34.33%。菌株SF4的无菌发酵液对核盘菌均有抑制效果随无菌发酵液浓度的减少而降低。3分析了内生菌SF3、SF4对核盘菌菌核生长的影响。结果显示两菌株都可延缓核盘菌菌核形成的时间,减少菌核形成的数目,处理前期也可抑制菌核的萌发。4测定了菌株SF3和SF4挥发性产物对核盘菌的抑制作用。结果表明,菌株SF3和SF4挥发性产物对供试核盘菌的菌丝生长均有一定的抑制作用,在培养的第2d菌株SF3和SF4对核盘菌菌丝生长的抑制率分别为28.66%和33.13%。5测定了内生菌SF4对油菜菌核病的离体防治效果。结果发现SF4活菌悬液和无菌发酵液对油菜菌核病的离体防效在处理的第2d,分别达到100.00%和73.23%。6对内生菌SF4的抗菌谱进行分析。结果显示内生菌SF4对多种病原真菌均有拮抗作用,说明菌株SF4具有广谱抗菌性。7利用内生菌SF4的形态特征结合生理生化测定及16S rDNA的序列分析对内生菌SF4进行鉴定,结果显示菌株SF4为多粘芽孢杆菌。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
文献综述  10-21
  0.1 植物内生菌概述  10-13
    0.1.1 植物内生菌概念  10
    0.1.2 植物内生菌与宿主植物间的关系  10
    0.1.3 内生菌的分布及多样性  10-11
    0.1.4 内生菌的分离  11
    0.1.5 植物内生菌的分类及应用  11-13
  0.2 植物内生菌在生物防治中的应用  13-15
    0.2.1 产生抗菌物质  13-14
    0.2.2 促进植物生长  14
    0.2.3 与病原菌竞争营养物质和生态位  14
    0.2.4 增加宿主植物的他感作用  14-15
  0.3 油菜菌核病研究现状  15-19
    0.3.1 油菜菌核病发生与危害  15-16
    0.3.2 油菜菌核病的传统防治措施  16-17
    0.3.3 油菜菌核病的生物防治  17-19
  0.4 内生菌对油菜菌核病防治研究  19-21
    0.4.1 油菜内生菌多样性  19
    0.4.2 内生菌在油菜菌核病防治中的应用  19-21
1 引言  21-23
2 材料与方法  23-32
  2.1 试验材料  23-24
    2.1.1 供试菌株  23
    2.1.2 培养基  23
    2.1.3 试剂  23-24
    2.1.4 试验器材  24
  2.2 油菜菌核病生防菌的分离和筛选  24-25
    2.2.1 待测菌株的分离纯化  24-25
    2.2.2 供试菌株的培养和活化  25
    2.2.3 核盘菌抑制菌的筛选  25
  2.3 两株内生生防菌SF3、SF4的平板抑制活性测定  25
  2.4 内生菌SF3、SF4的无菌发酵液对核盘菌的抑制活性测定  25-26
    2.4.1 菌株SF3、SF4无菌发酵液的抑菌效果  25-26
    2.4.2 菌株SF3、SF4不同发酵时间的无菌发酵液的抑菌效果  26
    2.4.3 菌株SF4不同浓度的无菌发酵液对核盘菌的抑制  26
  2.5 内生菌SF3、SF4对核盘菌菌核生长的影响  26-27
    2.5.1 内生菌SF3、SF4对核盘菌菌核形成的影响  26-27
    2.5.2 内生菌SF3、SF4对核盘菌菌核萌发的影响  27
  2.6 内生菌SF3、SF4挥发性产物对核盘菌的抑制  27
  2.7 内生菌SF4对油菜菌核病的离体防效测定  27
  2.8 内生菌SF4的抗菌谱分析  27-28
  2.9 内生菌SF4的鉴定  28-32
    2.9.1 内生菌SF4的形态鉴定  28
    2.9.2 内生菌SF4的生理生化鉴定  28-29
    2.9.3 内生菌SF4的16S rDNA序列测定  29-32
3 结果与分析  32-45
  3.1 油菜菌核病生防菌株的分离筛选  32-33
  3.2 内生菌SF3、SF4对核盘菌的平板抑制活性测定  33-35
  3.3 内生菌SF3、SF4的无菌发酵液对核盘菌的抑制活性测定  35-37
    3.3.1 菌株SF3、SF4无菌发酵液对核盘菌的抑制效果  35-36
    3.3.2 菌株SF3、SF4不同发酵时间的无菌发酵液的抑菌效果  36
    3.3.3 菌株SF4不同浓度的无菌发酵液对核盘菌的抑制  36-37
  3.4 内生菌SF3、SF4对核盘菌菌核生长的影响  37-38
    3.4.1 内生菌SF3、SF4对核盘菌菌核形成的影响  37
    3.4.2 内生菌SF3、SF4对核盘菌萌发的影响  37-38
  3.5 内生菌SF3、SF4挥发性产物对核盘菌抑制作用测定  38-39
  3.6 内生菌SF4对油菜菌核病的离体防效测定  39-40
  3.7 内生菌SF4抗菌谱的测定  40-41
  3.8 生防菌SF4的鉴定  41-45
    3.8.1 内生菌SF4的形态鉴定  41
    3.8.2 内生菌SF4的生理生化性质  41-42
    3.8.3 菌株SF4的分子鉴定  42-45
4 讨论  45-48
  4.1 油菜菌核病的防治  45
  4.2 油菜内生菌的分离  45
  4.3 生防菌的筛选  45
  4.4 内生菌抑菌活性的测定  45-46
  4.5 内生菌SF3和SF4对菌核生长的影响  46
  4.6 内生菌SF4的离体防效  46
  4.7 内生菌SF4的抗菌谱分析  46-47
  4.8 内生菌SF4的鉴定  47-48
5 结论  48-49
参考文献  49-55
致谢  55-56
作者简介  56

油菜内生拮抗细菌的筛选及对菌核病菌的抑制作用研究

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