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人Rb94基因联合γ射线照射对K150细胞生长影响的体内、外研究

作　者: 王蕾
导　师: 姜恩海；李进；邢志伟
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 放射医学
关键词: Rb94基因腺病毒表达载体基因治疗放疗肿瘤
分类号: R739.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma, Rb)基因是最早克隆出来的人类肿瘤抑制基因,Rb基因的缺失和突变将引起细胞无限生长和繁殖,进而导致肿瘤的发生。到目前为止,以Rb为靶基因的抗肿瘤基因治疗的研究报导很多。近期研究发现,N端缺失的Rb蛋白—PRb94(野生型全长PRb110的NH2末端缺失112个氨基酸残基)对头颈部癌、膀胱癌、前列腺癌等细胞系具有比PRb110更强的肿瘤抑制效应。放射治疗是临床上肿瘤治疗的经典方法之一,近年有人将放疗与病毒介导的基因治疗联合使用,有明显的相互增强的作用。本实验的目的是探讨外源性Rb94基因联合放射对食管癌细胞系K150生长的抑制作用,为临床上进行Rb94基因-放射治疗肿瘤奠定实验基础。本研究将重组腺病毒Ad-Rb94于体外转染K150细胞,转染后进行6Gy137Csγ射线照射,分为空白对照组、Ad-LacZ对照组、Ad-Rb94组、照射组和Ad-Rb94联合照射组,观察K150细胞的生长曲线、细胞周期、细胞凋亡和Rb94基因表达的变化。并观察荷人体肿瘤裸鼠在Ad-Rb94单独作用及与辐射协同作用下肿瘤体积、相对肿瘤体积、瘤重、相对肿瘤增殖率以及肿瘤体积生长变化的时间曲线,评价其抗肿瘤活性。从我们所得的实验结果可知,Ad-Rb94转染K150细胞后,Ad-Rb94组、照射组和联合照射组对K150细胞生长均具有抑制作用,联合照射组的抑制效应最强,明显高于Ad-Rb94组和照射组。联合照射组K150细胞中Rb94基因表达量最多,分别是Ad-Rb94组和空白对照组的1.87倍和2.92倍。荷人体肿瘤裸鼠在Ad-Rb94单独作用及辐射协同作用下肿瘤体积、相对肿瘤体积、瘤重均低于对照组,而且联合照射组的肿瘤生长受抑制效应最强。结果说明单独Rb94基因或照射均对K150细胞的生长具有一定的抑制作用,而Ad-Rb94联合放射抑瘤效应最明显,有效地抑制肿瘤细胞的生长。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
前言  8-15
材料与方法  15-33
  1. 实验材料  15-19
    1.1 人食管癌细胞系K150  15
    1.2 试剂盒  15
    1.3 引物  15
    1.4 主要试剂  15-16
    1.5 主要试剂、缓冲液和凝胶的配置  16-18
    1.6 主要培养基的配制  18
    1.7 细胞培养耗材  18
    1.8 主要仪器设备  18-19
  2. 实验方法  19-33
    2.1 K150细胞培养、传代与冻存  19-21
    2.2 重组腺病毒颗粒的制备  21-24
    2.3 体外联合抑瘤试验  24-30
    2.4 体内联合抑瘤实验  30-33
实验结果  33-36
  1. Ad-Rb94转染后食管癌K150细胞生长的抑制曲线  33
  2. Ad-Rb94转染后第6天K150细胞生长的抑制率  33-34
  3. Ad-Rb94转染对K150细胞周期及凋亡的影响  34
  4. Ad-Rb94转染后K150细胞中Rb94基因表达的变化  34-35
  5. Ad-Rb94转染后对裸鼠肿瘤大小的影响  35-36
讨论  36-40
  1. 目的基因的选择  36
  2. 联合治疗的提出  36
  3. 含目的基因的pENTRTM1A质粒的构建  36-37
  4. 腺病毒表达载体的选择  37-38
  5. 目的基因抑制肿瘤细胞生长的研究  38
  6. Ad-Rb94转染后K150细胞中Rb94基因表达的变化的研究  38-39
  7. 联合抑瘤作用  39
  8. Ad-Rb94转染后对裸鼠肿瘤大小的影响  39-40
结论  40-41
参考文献  41-46
附录  46-47
综述  47-52
致谢  52-53

人Rb94基因联合γ射线照射对K150细胞生长影响的体内、外研究

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