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穿心莲内酯对肥胖的干预作用及其机理研究

作　者: 冯丽娜
导　师: 陈卫
学　校: 浙江工商大学
专　业: 食品科学与工程
关键词: 穿心莲内酯肥胖氧化应激细胞分化脂代谢
分类号: R589.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

肥胖是机体能量摄入和能量消耗失衡而导致体内脂肪积聚过多和(或)分布异常,造成体重过度增长,并引起人体病理、生理改变的一种状态,现已成为世界性的公共卫生问题。从天然植物中挖掘安全有效的功能因子,探索其干预肥胖的功效,已成为近年来功能性食品和天然药物研究领域的一个热点。穿心莲内酯为爵床科植物穿心莲的主要有效成份,具有祛热解毒,消炎止痛之功效,但是有关其减肥降脂的生理功能至今未见报道。本论文通过构建脂肪细胞模型和肥胖动物模型,运用分子探针、荧光标记、细胞分化等技术,探究了穿心莲内酯干预肥胖的功效及其作用机理。主要结果如下：(1)采用3T3-L1前脂肪细胞作为细胞模型,发现穿心莲内酯能显著抑制3T3-L1细胞的增殖,并表现出剂量和作用时间的依赖性。穿心莲内酯作用3T3-L1细胞24h、48h和72h的细胞半数抑制浓度ICso,分别为16.4μg/mL,13.0μg/mL,8.6μg/mL。运用动态荧光可视技术、分子探针等现代分子细胞学技术,研究了穿心莲内酯抑制前脂肪细胞增殖的机理。结果发现穿心莲内酯可以诱导3T3-L1细胞发生一种特殊的ROS介导的程序性死亡。进一步研究发现,穿心莲内酯能有效抑制脂肪细胞分化,10μg/mL剂量的抑制率达到18.5%；通过对分化的细胞进行活力测定,发现10μg/mL穿心莲内酯对分化的脂肪细胞没有毒性。进一步研究证实穿心莲内酯能够有效抑制脂肪细胞中甘油三酯的生成,并且促进其分解。上述结果表明,穿心莲内酯能有效抑制前脂肪细胞增殖与脂肪细胞的分化,并促进甘油三酯的分解。(2)采用研究肥胖的C57BL/6小鼠,通过高脂饲料诱导构建肥胖小鼠模型。在此基础上,研究了穿心莲内酯对高脂饮食诱导肥胖的干预功效。结果表明穿心莲内酯对小鼠体重增长率、Lee’s指数、食物利用率、体内脂肪具有明显的降低作用,并且呈剂量依赖关系。低剂量穿心莲内酯(50mg/kg)即能显著降低试验小鼠的体重增长,减少小鼠体内脂肪,有效降低小鼠血糖；中剂量穿心莲内酯(100mg/kg)能有效降低肥胖小鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平,提高游离脂肪酸(FFA)水平；高剂量穿心莲内酯(150mg/kg)对肝脏中的胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平有一定降低作用,但是对肝脏中的游离脂肪酸FFA无显著影响。进一步研究发现穿心莲内酯能够提高血清总抗氧化能力,降低血清MDA水平；但对血清SOD酶活力以及肝脏的抗氧化能力无显著影响。综上所述,本文的研究结果为天然植物功能因子干预肥胖的功效及作用机理的研究提供了一种思路和方法,并为穿心莲内酯开发天然、安全、有效的功能性减肥产品提供一定的科学依据。

全文目录

摘要  2-4
ABSTRACT  4-7
缩略词表  7-9
目录  9-11
第1章绪论  11-24
  1.1 肥胖症及减肥药物的研究现状  11-13
  1.2 脂肪细胞分化及调控  13-16
  1.3 天然产物对肥胖干预作用的研究进展  16-21
  1.4 穿心莲内酯的研究现状  21-23
  1.5 本文的立题依据、研究内容及意义  23-24
第2章穿心莲内酯干预脂肪细胞增殖和分化的研究  24-43
  2.1 前言  24
  2.2 材料与试剂  24-25
    2.2.1 细胞系  24
    2.2.2 试剂  24-25
    2.2.3 主要设备  25
  2.3 方法  25-29
    2.3.1 试剂的配制  25-26
    2.3.2 细胞培养方法  26
    2.3.3 MTT法检测细胞活力  26-27
    2.3.4 Hoechst检测细胞核的变化  27
    2.3.5 活性氧自由基(ROS)的检测  27
    2.3.6 线粒体膜电位的检测  27
    2.3.7 前脂肪细胞分化方法  27-28
    2.3.8 油红O染色法  28
    2.3.9 甘油三酯含量的测定  28
    2.3.10 脂质分解的测定  28-29
    2.3.11 蛋白浓度的测定  29
    2.3.12 统计分析  29
  2.4 实验结果  29-42
    2.4.1 穿心莲内酯对3T3-L1前脂肪细胞细胞活力的影响  29-31
    2.4.2 穿心莲内酯对3T3-L1前脂肪细胞状态的影响  31-33
    2.4.3 NAC、z-VAD、TFP对穿心莲内酯诱导前脂肪细胞活力下降的影响  33-35
    2.4.4 NAC对穿心莲内酯诱导的前脂肪细胞状态变化的影响  35-38
    2.4.5 穿心莲内酯对3T3-L1前脂肪细胞分化成脂的影响  38-39
    2.4.6 穿心莲内酯对分化的3T3-L1细胞活力的影响  39-40
    2.4.7 穿心莲内酯对3T3-L1脂肪细胞成脂、解脂的影响  40-42
  2.5 讨论与小结  42-43
第3章穿心莲内酯干预肥胖的动物实验研究  43-62
  3.1 前言  43
  3.2 材料与试剂  43-44
    3.2.1 实验动物  43
    3.2.2 试剂  43-44
    3.2.3 主要设备  44
  3.3 方法  44-46
    3.3.1 C57小鼠预防性肥胖试验  44-45
    3.3.2 C57小鼠血清指标的测定  45
    3.3.3 C57小鼠肝脏指标的测定  45
    3.3.4 C57小鼠附睾周围脂肪组织切片的制作  45-46
    3.3.5 C57小鼠肝脏切片的制作  46
    3.3.6 统计分析  46
  3.4 实验结果  46-61
    3.4.1 穿心莲内酯对C57小鼠体重及Lee's指数的影响  46-48
    3.4.2 穿心莲内酯对C57小鼠摄食的影响  48-49
    3.4.3 穿心莲内酯对C57小鼠脏器的影响  49-50
    3.4.4 穿心莲内酯对C57小鼠脂肪的影响  50-52
    3.4.5 穿心莲内酯对C57小鼠血糖、血脂的影响  52-54
    3.4.6 穿心莲内酯对C57小鼠肝脏脂肪的影响  54-55
    3.4.7 穿心莲内酯对C57小鼠血清抗氧化能力的影响  55-57
    3.4.8 穿心莲内酯对C57小鼠肝脏抗氧化能力的影响  57-59
    3.4.9 穿心莲内酯对C57小鼠脂肪组织、肝脏组织形态的影响  59-61
  3.5 讨论与小结  61-62
第4章总结与展望  62-65
  4.1 总结  62-64
  4.2 展望  64-65
参考文献  65-71
攻读硕士学位期间主要的研究成果  71-72
致谢  72-73

穿心莲内酯对肥胖的干预作用及其机理研究

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