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芒果炭疽病挥发性抑菌物质产生菌的筛选及拮抗机理研究

作　者: 郑敏
导　师: 王庆国
学　校: 山东农业大学
专　业: 食品科学
关键词: 挥发性物质短小芽胞杆菌苏云金芽胞杆菌生物熏蒸炭疽病芒果
分类号: TS255.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

芒果肉质香甜嫩滑、营养丰富深受消费者喜爱。芒果炭疽病是由真菌胶胞炭疽菌引起的，其症状尤为普遍且危害性极大。目前芒果炭疽病的主要防治方法有选育抗病品种、田间防治、化学方法防治、物理方法防治、生物防治以及各种方法结合等。近几年，将拮抗微生物挥发性代谢产物应用于果蔬保鲜及控制采后病害的相关报道越来越多，但关于拮抗微生物挥发性代谢产物应用于芒果炭疽病防治的研究还未有相关报道。因此研究拮抗微生物挥发性代谢产物对芒果炭疽病菌的生物防治作用有重要的意义。本研究旨在通过一系列试验研究能够筛选出挥发性代谢产物能稳定有效抑制芒果炭疽病的拮抗菌，确定主要的活性气体及最佳使用浓度。主要结果如下：(1)试验筛选出4株拮抗菌对芒果炭疽病有稳定的抑制作用，分别为TB09、TB30、TB52和TB72。在平板试验中，TB09和TB72的抑制效果最佳，抑制率分别为88.87%和80.07%。活体试验中，TB09和TB72均能有效控制炭疽病的发展，抑制率均在80%以上。在控制芒果自然发病试验中，对照组腐烂指数高达近80%，TB09，TB72腐烂指数分别为41.67%和34.17%。(2)通过16S rDNA测序，然后经NCBI BLAST得出TB09与短小芽胞杆菌的相似度达98.01%，TB72与苏云金芽胞杆菌的相似度为99.50%，再结合两株菌株菌落形态特征判断TB09为短小芽胞杆菌，TB72为苏云金芽胞杆菌。(3)通过GC-MS测定挥发性气体主要有2-壬酮、2-癸酮、β-苯乙胺、2-甲基吡嗪、百里香酚、β-苯乙胺等。试验测定了挥发性物质对病原菌菌丝的抑制作用，结果表明2-壬酮，百里香酚，β-苯乙胺、2-癸酮和2-甲基吡嗪对病原菌有较强的抑制作用。解除药品熏蒸作用后，只有2-甲基吡嗪处理组中菌落有生长现象。五种挥发性成分混合液平板试验结果表明，40μL L-1已基本能完全抑制病原菌的生长。在单品缺失试验中，用无菌水替代百里香酚后菌丝的生长抑制率由100%降低至65.57%。(4)芒果熏蒸初步实验结果表明，两种拮抗菌具有进一步研发的价值，产物具有产业化开发的优势。活体试验得出混合性气体可有效控制芒果采后炭疽病的发生。不同浓度混合性气体熏蒸后的芒果发病率明显降低，商品果率和可食用果率明显高于对照组，且能有效的控制芒果的腐烂程度。

全文目录

符号说明  4-8
中文摘要  8-9
Abstract  9-11
1 前言  11-22
  1.1 芒果产业现状  11-13
  1.2 芒果炭疽病的危害及发生规律  13
  1.3 芒果炭疽病的防治研究进展  13-21
    1.3.1 抗病品种的选育  14-15
    1.3.2 农业防治  15
    1.3.3 化学药剂防治  15-17
    1.3.4 物理防治  17-19
    1.3.5 生物防治  19-21
  1.4 拮抗菌挥发性代谢产物在芒果炭疽病防治中的应用  21
  1.5 本研究内容、目的和意义  21-22
    1.5.1 研究内容  21-22
    1.5.2 研究目的及意义  22
2 材料与方法  22-32
  2.1 试验材料  22-23
    2.1.1 供试芒果品种  22
    2.1.2 供试培养基  22
    2.1.3 供试菌种  22
    2.1.4 供试试剂  22-23
  2.2 试验仪器  23
  2.3 试验方法  23-32
    2.3.1 土壤微生物的分离与纯化  23-24
    2.3.2 拮抗细菌的筛选  24-25
    2.3.3 拮抗菌的活体试验  25-26
    2.3.4 拮抗菌菌株的鉴定  26-30
    2.3.5 拮抗菌挥发性代谢产物的测定  30
    2.3.6 各种挥发性气体成分对菌丝的抑制作用  30-31
    2.3.7 混合挥发性物质对病原菌菌丝的抑制作用  31
    2.3.8 混合挥发性物质中单一成分对病原菌菌丝的抑制作用  31
    2.3.9 混合挥发性物质的自然发病活体试验  31-32
3 实验结果与分析  32-45
  3.1 土壤微生物的分离纯化与抑菌活性鉴定  32-33
  3.2 拮抗菌的活体试验  33-37
    3.2.1 接种病原菌菌苔活体试验  33-34
    3.2.2 接种病原菌胞子悬浮液活体试验  34-35
    3.2.3 自然发病活体试验  35-37
  3.3 TB09 和 TB72 菌种的鉴定  37-39
  3.4 拮抗菌挥发性气体成分的鉴定  39-41
  3.5 挥发性物质对病原菌菌丝的抑制作用  41-42
  3.6 人工合成的混合性挥发性成分对病原菌的抑制作用  42
  3.7 混合挥发性物质中单一成分对病原菌菌丝的抑制作用  42-43
  3.8 混合挥发性物质的自然发病活体试验  43-45
4 讨论  45-49
  4.1 拮抗菌的鉴定  45-46
  4.2 微生物挥发性代谢产物在生物防治中的应用  46
  4.3 拮抗菌挥发性代谢产物的抑菌原理  46-47
  4.4 拮抗菌挥发性代谢产物中的主要抑菌成分  47-48
  4.5 拮抗菌与挥发性代谢产物对芒果炭疽病自然发病的抑制作用  48
  4.6 研究中的优缺点及展望  48-49
5 结论  49-51
  5.1 拮抗菌的筛选  49
  5.2 拮抗菌的活体试验  49
  5.3 拮抗菌的鉴定  49
  5.4 拮抗菌挥发性代谢产物有效成分的鉴定  49-50
  5.5 混合性气体对芒果炭疽病的抑制作用  50-51
参考文献  51-58
致谢  58-59
攻读学位期间发表论文的目录及对应章节  59

芒果炭疽病挥发性抑菌物质产生菌的筛选及拮抗机理研究

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