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大叶蒟抗抑郁物质基础及分析方法研究

作　者: 罗学军
导　师: 黄艳萍
学　校: 天津医科大学
专　业: 药物分析
关键词: 大叶蒟抗抑郁物质基础分析方法入血成分反向研发一测多评
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

大叶药Piper laetispicum C.DC.,为胡椒科胡椒属植物,主要分布在我国广东、广西、云南及海南省。民间用于活血、消肿、止痛,主治跌打损伤、瘀血肿痛。近期研究发现大叶药具有较强的抗抑郁作用,其活性和一系列酰胺类化合物有大。为进一步研究大叶药抗抑郁物质基础及其分析方法,服务于新药开发,本课题采用反向研发模式,即从药材入血成分出发,进行入血成分分析、制备及结构鉴定,然后对得到的单体化合物进行抗抑郁活性筛选,确定大叶药抗抑郁主要活性成分。最后,本课题开发了一种大叶药多成分分析方法,可以为大叶药活性成分的进一步开发提供技术支持,也可以作为将来大叶药中间体及制剂的含量测定方法。具体内容包括以下四个方面：1、入血成分分析利用体内抗抑郁动物模型对大叶药进行抗抑郁活性验证,结果表明大叶药提取物显示较好的抗抑郁活性。采用肠外翻囊模型进行大叶药入血成分的分析,结果显示大叶药醇提取物中除个别化合物外,其余化合物均能够在肠吸收透过液中被检测到,以母液19个色谱峰计,在十二指肠吸收液中检测到16个,结肠和空肠中分别检测到15个,直肠中检测到10个。这说明大叶药醇提物中大多数化合物均可以入血。2、入血成分制备和结构确认以大叶药入血成分的HPLC色谱图为参照,采用大孔树脂富集,硅胶柱分离,Flash快速制备等手段,得到14个单体化合物,其中12个为酰胺类化合物,化合物G13-1(1-[(2E,4E,7E)-9-(?)(3,4－次甲二氧基苯)九碳二烯酰]四氢吡咯)和G13-2(1-[(2E,7E)-N-7-(3,4-次甲二氧基苯)九碳二烯酰]四氢吡咯)为新化合物,G9((2E,4E)-N-异丁基-9-(3,4-次甲二氧基苯)七碳二烯酰胺)、G12(5’-甲氧基-3’,4’-次甲二氧基桂皮酸四氢吡咯)和G14(1-[(2E,4E)-9-(3,4-次甲二氧基苯)七碳二烯酰]四氢吡咯)为大叶蒟中首次分离的化合物。经HPLC-PDA测定,12个酰胺类化合物纯度均能达到98%以上,可以在后续的研究中作为对照品使用。3、活性研究采用小鼠尾悬吊和小鼠强迫游泳抗抑郁模型对部分化合物进行活性研究,结果表明化合物G5、G6和G11均具有明显的抗抑郁活性,其中G5和G6与空白对照组比较具有显著性差异,强于相同剂量的阳性药氟西汀组。G6为大叶药素,其活性研究结果和文献报道的基本吻合,表明大叶药酰胺类生物碱是大叶药抗抑郁活性的物质基础。4、分析方法研究建立了能同时测定大叶药中12个酰胺类生物碱的HPLC分析方法。该方法能够很好的分离12个生物碱并且有效避免了其他杂质的干扰。方法中色谱柱采用了C18色谱柱、流动相：乙腈-水(0 min,55:45；20 min,60:40；30min,90:10；32 min,55:45；37 min,55:45,),流速为1 ml/min,DAD检测器。该方法简单、快速、专属性强,稳定性好,可以用于大叶药药材及相关产品的质量控制。本实验还探索了一测多评技术在大叶药酰胺类化合物含量测定中的应用,结果表明该方法校正因子在不同条件下相对稳定,但是色谱峰的定位方面存在较大误差,由含量测定的结果看,与标准曲线法计算结果偏差很小。因此在规定仪器和色谱柱型号的条件的该方法可以用于大叶药中12个酰胺类化合物的含量测定。

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中文摘要 4-6Abstract 6-10缩略语/符号说明 10-11前言 11-15 1 研究成果与现状 11-13 2 研究目的和方法 13-15一、大叶药入血成分分析 15-26 1.1 大叶药抗抑郁活性验证 15-20 1.1.1 实验材料 15 1.1.2 实验方法 15-17 1.1.3 结果与讨论 17-19 1.1.4 小结 19-20 1.2 入血成分分析 20-26 1.2.1 实验材料 20 1.2.2 实验方法 20-22 1.2.3. 实验结果 22-24 1.2.4 讨论 24-25 1.2.5 小结 25-26二、大叶蒟入血成分分离纯化及结构鉴定 26-36 2.1 实验材料 26 2.1.1 药品与试剂 26 2.1.2 实验仪器 26 2.2 实验方法与结果 26-34 2.2.1 入血成分的分离纯化 26-28 2.2.2 化合物的结构鉴定结果 28-34 2.2.3 化合物纯度判断 34 2.3 讨论 34-35 2.4 小结 35-36三、大叶药入血成分抗抑郁活性研究 36-41 3.1 实验材料和仪器 36 3.1.1 实验药品与试剂 36 3.1.2 实验动物 36 3.1.3 实验仪器 36 3.2 实验方法 36-37 3.2.1 体内抗抑郁活性 36-37 3.2.2 数据分析 37 3.3 结果与讨论 37-40 3.3.1 单次给药药效结果 37-39 3.3.2 多次给药的药效结果 39-40 3.4 小结 40-41四、大叶蒟分析方法研究 41-60 4.1 大叶药酰胺类化合物含量测定方法的建立 41-52 4.1.1 实验材料和仪器 41 4.1.2 实验方法和结果 41-51 4.1.3 讨论 51-52 4.1.4 小结 52 4.2 一测多评法用于大叶药酰胺类化合物的含量测定 52-60 4.2.1 实验材料 53 4.2.2 实验方法与结果 53-55 4.2.3 讨论 55-59 4.2.4 小结 59-60结论 60-62参考文献 62-66发表论文和参加科研情况说明 66-68附录 68-82综述中药多成分同时定量分析方法及其在中药质控中的应用研究进展 82-94 综述参考文献 90-94致谢 94

大叶蒟抗抑郁物质基础及分析方法研究

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