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新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05对松枯梢病生防作用

作　者: 黄洁芳
导　师: 叶建仁
学　校: 南京林业大学
专　业: 森林保护学
关键词: 新洋葱伯克霍尔德菌 松枯梢病 生物防治 Burkholderia cenocepacia 内生细菌
分类号: S763.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本文系统研究一株松树内生细菌--新洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cenocepacia) NSM-05菌株对松枯梢病菌的拮抗作用、在松树体内定殖规律、对松枯梢病田间生防作用、菌株的安全性检测及其抗菌物质的初步分离。为新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05菌株在松枯梢病生物防治中高效而安全利用打下坚实的基础。主要结果如下：平板对峙试验结果表明,供试9株松树内生细菌中,只有新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05菌株对松枯梢病菌具有较强拮抗作用,抑菌带宽度(松枯梢病菌与NSM-05菌株的距离)11.15mm,且抑菌效果持久稳定。同时发现NSM-05菌株发酵液对松材线虫强毒虫株AMA3具有杀线活性。喷雾法和灌根法接种,均可使NSM-05标记菌株在马尾松、黑松以及湿地松体内成功定殖,定殖的主要部位都是茎部,根部有少量定殖,而在针叶内没有回收到标记菌株。在温室条件下NSM-05菌株发酵液对一年生湿地松苗具有一定的促进生长作用,接种6个月后湿地松苗在株高和地茎上与对照表现出明显差异。NSM-05菌株发酵液对松枯梢病田问生防效果好。在接种松枯梢病菌前5天,先接种NSM-05菌株发酵液,对松枯梢病的防治可以起到非常好的预防效果,喷雾接种防效达93.76%,灌根接种防效达87.49%。先接种松枯梢病菌,3天后再采用喷雾法和灌根法接种NSM-05菌株发酵液,均无防效。植物模型安全性检测,NSM-05菌株对洋葱和苜蓿均无致病性,初步认为该菌对植物和人畜安全。NSM-05菌株菌体本身对松枯梢病菌无拮抗作用,抗菌物质主要存在于该菌的代谢产物中。针对NSM-05菌株无菌发酵液采用有机溶剂萃取法和硫酸铵沉淀法初步分离得到抗菌物质,其中乙酸乙酯萃取物对松枯梢病菌具有强烈的抑菌活性,抑菌圈直径36.85mm；硫酸铵沉淀物抑菌活性较小,抑菌圈直径19.03mm。

全文目录


致谢  3-4
摘要  4-5
Abstract  5-10
前言  10-11
第一章 文献综述  11-23
  1 松枯梢病研究现状  11-15
    1.1 分布与危害  11
    1.2 病原及症状  11-12
    1.3 发病规律  12-13
    1.4 发病因素  13
    1.5 防治现状  13-15
      1.5.1 化学防治  14
      1.5.2 营林措施  14
      1.5.3 抗病选育  14-15
      1.5.4 生物防治  15
  2 植物内生细菌在植物病害生物防治中的作用  15-18
    2.1 植物内生细菌的定义  15
    2.2 植物内生细菌的分离筛选及检测方法  15-16
    2.3 植物内生细菌的生物学作用  16-17
    2.4 植物内生细菌在植物病害生物防治中的研究进展  17-18
    2.5 松树内生细菌的研究进展  18
  3 洋葱伯克霍尔德氏菌研究现状  18-23
    3.1 洋葱伯克霍尔德氏菌的分类  18-19
    3.2 洋葱伯克霍尔德氏菌有益作用研究  19-20
      3.2.1 对有毒物质及油脂的生物降解  19
      3.2.2 促进植物生长  19-20
      3.2.3 防治植物病害  20
    3.3 洋葱伯克霍尔德氏菌生防作用机制  20-21
      3.3.1 竞争作用  20-21
      3.3.2 拮抗作用  21
    3.4 洋葱伯克霍尔德氏菌安全评价  21-23
第二章 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05对松枯梢病菌的拮抗作用  23-32
  1 材料与方法  23-25
    1.1 供试菌株  23
    1.2 供试培养基  23-24
    1.3 供试菌株培养  24
    1.4 9株松树内生细菌对松枯梢病菌的抑菌活性检测  24
    1.5 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05菌株对松枯梢病菌抑菌作用稳定性  24-25
      1.5.1 连续传代培养对NSM-05菌株抑菌作用的影响  24
      1.5.2 冷藏对NSM-05菌株抑菌作用的影响  24-25
      1.5.3 NSM-05菌株对松枯梢病菌抑菌作用持效性  25
    1.6 NSM-05菌株生长曲线测定  25
    1.7 9株松树内生细菌对松材线虫MA3的影响  25
  2 结果与分析  25-30
    2.1 9株松树内生细菌对松枯梢病菌的抑菌活性  25-26
    2.2 连续传代培养对NSM-05菌株抑菌作用的影响  26
    2.3 冷藏对NSM-05菌株抑菌作用的影响  26-27
    2.4 NSM-05菌株抑菌作用的持效性  27
    2.5 NSM-05菌株NB和PD培养基发酵的生长曲线  27-28
    2.6 NB和PD培养基对松材线虫AMA3的影响  28-29
    2.7 9株松树内生细菌NB和PD发酵液对松材线虫AMA3的影响  29-30
  3 结论与讨论  30-32
第三章 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05在松树体内定殖研究  32-41
  1 材料与方法  32-34
    1.1 供试菌株  32
    1.2 供试植物材料  32
    1.3 供试培养基  32
    1.4 供试菌株培养  32-33
    1.5 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05抗利福平标记  33
      1.5.1 NSM-05对利福平的天然抗药性检测  33
      1.5.2 NSM-05抗利福平突变菌株的筛选  33
      1.5.3 标记菌株NSM-05R遗传稳定性测定  33
    1.6 标记菌株NSM-05R在松树体内的定殖  33-34
      1.6.1 标记菌株NSM-05R的培养  33
      1.6.2 标记菌株NSM-05R的接种  33-34
      1.6.3 标记菌株NSM-05R的回收  34
    1.7 回收菌株、标记菌株和原始菌株的比较  34
      1.7.1 生物学特征及生理生化指标比较  34
      1.7.2 生长动力学比较  34
      1.7.3 对病原菌的拮抗作用比较  34
  2 结果与分析  34-39
    2.1 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05菌株对利福平的天然抗药性  34-35
    2.2 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05抗利福平突变菌株的筛选结果  35
    2.3 标记菌株NSM-05R的遗传稳定性  35
    2.4 标记菌株NSM-05R在松树体内的定殖部位  35-36
    2.5 标记菌株NSM-05R在湿地松体内定殖密度及动态变化规律  36-37
    2.6 回收菌株、标记菌株和原始菌株比较  37-39
      2.6.1 生物学特征及生理生化指标比较  37-38
      2.6.2 生长动力学比较  38
      2.6.3 拮抗作用比较  38-39
  3 结论与讨论  39-41
第四章 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05对松枯梢病田间生防效果  41-47
  1 材料与方法  41-43
    1.1 供试菌株  41
    1.2 供试植物材料  41
    1.3 供试培养基  41
    1.4 供试菌株培养  41-42
    1.5 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05菌株对松树生长的影响  42
    1.6 松枯梢病菌致病力测定  42
    1.7 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05对松枯梢病的田间生防试验  42-43
  2 结果与分析  43-46
    2.1 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05发酵液对湿地松苗的促生长作用  43-44
    2.2 松枯梢病菌致病力  44-45
    2.3 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05发酵液对松枯梢病的生防效果  45-46
  3 结论与讨论  46-47
第五章 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05抗菌物质的初步分离  47-53
  1 材料与方法  47-49
    1.1 供试菌株  47
    1.2 供试培养基  47
    1.3 供试菌株培养  47-48
    1.4 NSM-05菌体破碎液对松枯梢病菌的抑菌活性检测  48
    1.5 NSM-05无菌发酵液对松枯梢病菌抑菌活性检测  48
    1.6 NSM-05硫酸铵粗提物对松枯梢病菌抑菌活性检测  48-49
    1.7 NSM-05有机溶剂萃取物对松枯梢病菌抑菌活性检测  49
  2 结果与分析  49-52
    2.1 NSM-05菌体破碎液对松枯梢病菌无抑菌活性  49
    2.2 NSM-05无菌发酵液对松枯梢病菌的拮抗作用  49-50
    2.3 NSM-05硫酸铵沉淀物对松枯梢病菌的拮抗作用  50-51
    2.4 NSM-05有机溶剂萃取物对松枯梢病菌的拮抗作用  51-52
  3 结论与讨论  52-53
第六章 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05安全性检测  53-58
  1 材料与方法  53-54
    1.1 供试菌株  53
    1.2 供试植物材料  53
    1.3 供试培养基  53
    1.4 供试菌株培养  53-54
    1.5 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05对洋葱致病性测定  54
    1.6 新洋葱伯克霍尔德菌NSM-05对苜蓿生长的影响  54
  2 结果与分析  54-56
    2.1 洋葱接种结果  54-55
    2.2 苜蓿接种结果  55-56
  3 结论与讨论  56-58
全文总结与展望  58-61
  1 全文总结  58-59
  2 展望  59-61
参考文献  61-65
详细摘要  65-67
Abstract  67-68

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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 森林保护学 > 森林病虫害及其防治 > 各种树的病虫害及其防治
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