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孕激素对LPS作用后的蜕膜细胞形态学变化及PR、IL-1β、COX-2影响的研究

作　者: 钟淑娟
导　师: 姚若进
学　校: 中南大学
专　业: 妇产科
关键词: 蜕膜细胞 LPS 孕激素孕激素受体炎症反应
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：研究体外培养的人蜕膜细胞用不同浓度孕激素预处理,再加入一定浓度的脂多糖(LPS)后蜕膜细胞的形态学变化及细胞中孕激素受体(PR)及IL-1β、COX-2的表达差异,以探讨孕激素对由微生物感染诱发的自然流产的预防或治疗作用。方法：收集正常早孕期人工流产术中的蜕膜组织,进行体外原代细胞培养,用免疫荧光法检测胎盘泌乳素鉴定蜕膜基质细胞。当蜕膜细胞培养至3-4代后,将其分成6块培养皿；当每块培养皿细胞的贴壁率达到80%时,分别加入含有不同浓度孕激素的培基(Ong/ml、100ng/ml及500ng/ml)处理细胞,每个浓度有两块培养皿。处理24小时后,每个浓度的细胞分别加入含有不同浓度LPS的培养基(Ong/ml、100ng/ml)处理24h。后用HE染色方法及MTT法检测各组细胞之间形态学及细胞生长情况的改变,并采用半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组中PR、IL-1β及COX-2的表达水平,分析各组间的表达有无统计学差异。结果：1.人原代蜕膜细胞体外培养分离成功,经免疫荧光法检测蜕膜细胞胎盘泌乳素阳性率达95%；2.HE染色后各组细胞之间形态学改变并无差异及MTT检测各实验组的细胞增值率无明显改变；3.LPS能够降低蜕膜细胞中PR的表达,但是蜕膜细胞经高浓度的孕激素预处理后能够拮抗LPS对蜕膜细胞中PR表达的抑制;4.不同浓度孕激素预处理后能够抑制LPS作用后的蜕膜细胞中炎性因子IL-1β、COX-2的表达。结论：1.LPS能刺激蜕膜细胞分泌IL-1β、COX-2,并使细胞中PR表达下调；2.孕激素可拮抗LPS刺激蜕膜细胞对炎性因子的分泌及LPS对PR的抑制作用,上调PR的表达。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
第一章前言  9-11
第二章材料与方法  11-21
  2.1 主要试剂和仪器  11-13
  2.2 实验方法(实验重复10次)  13-20
  2.3 统计学分析  20-21
第三章结果  21-26
  3.1 人原代蜕膜细胞培养结果  21-22
  3.2 光镜下蜕膜细胞的形态学改变  22
  3.3 MTT法检测孕激素、LPS对蜕膜细胞活力的影响  22-23
  3.4 RT-PCR检测孕激素、LPS对蜕膜细胞中PR和IL-1B、COX-2 MRNA表达的影响  23-26
第四章讨论  26-31
  4.1 LPS、IL-1B及COX-2与自然流产的相关性  26-28
  4.2 孕激素及孕激素受体与自然流产的相关性  28-31
第五章结论  31-32
参考文献  32-38
综述  38-52
  参考文献  46-52
致谢  52

孕激素对LPS作用后的蜕膜细胞形态学变化及PR、IL-1β、COX-2影响的研究

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