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艾塞那肽对H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响及机制研究

作　者: 叶林
导　师: 覃数
学　校: 重庆医科大学
专　业: 内科学
关键词: 2-NBDG H9c2心肌细胞 葡萄糖摄取 Exendin-4 p38MAPK
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


第一部分2-NBDG用于H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的能力研究目的：评估荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl)amino]-2-deoxyglucose，2-NBDG)作为光学探针检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的能力。方法：间接免疫荧光法测定H9c2心肌细胞葡萄糖转运体(GLUT-1、GLUT-4)的表达；荧光酶标仪测定2-NBDG孵育H9c2细胞的最适浓度和时间。以2-NBDG最适浓度孵育H9c2心肌细胞，同时用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞内荧光强度差异，观察心肌细胞摄取2-NBDG情况。结果：(1)：接免疫荧光法显示H9c2心肌细胞表达GLUT-1、GLUT-4。(2)：2-NBDG孵育H9c2心肌细胞的最适浓度为100μmol/L和最适时间为30min。共聚焦成像和流式细胞仪均显示H9c2心肌细胞能有效摄取2-NBDG：激光共聚焦扫描成像显示2-NBDG组细胞内荧光信号(93.32±7.60)，2-NBDG+D-Glu组H9c2细胞内荧光信号表达(68.51±3.56)，但较单纯2-NBDG组荧光信号减弱27%(P<0.05)。流式细胞仪检测2-NBDG组荧光强度为51.17±5.09；2-NBDG+D-Glu组荧光强度为27.27±2.48较单纯2-NBDG组降低46.7%(P<0.01)。(3)：采用2-NBDG检测细胞葡萄糖摄取的方法，证实胰岛素能促进H9c2心肌细胞葡萄糖的摄取。结论：2-NBDG能迅速被表达GLUT-1、GLUT-4的H9c2心肌细胞摄取，且被D-Glu竞争性抑制，表明2-NBDG可作为一个方便且敏感的探针，用于检测细胞葡萄糖摄取的能力。第二部分Exendin-4对H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响目的：探索艾塞那肽(Exendin-4，EX-4)对H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响及其与p38MAPK信号通路的关系。方法：用不同浓度EX-4和不同孵育时间处理H9c2心肌细胞，探讨其时效-量效关系，确定EX-4处理H9c2细胞的最适浓度和时间，以EX-4最适浓度孵育H9c2心肌细胞。本实验细胞分组：正常对照组(NC组)，EX-4处理组(EX-4组)，EX-4+p38/β/γ/MAPK通路抑制剂BIRB796处理组(BIRB796组)，胰岛素处理对照组(Insulin组)，荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力，通过荧光酶标仪及流式细胞仪检测细胞内荧光表达强度差异，测出心肌细胞葡萄糖摄取变化。间接免疫荧光法检测H9c2心肌细胞GLP-1受体(GLP-1R)的表达。结果：(1)：H9c2心肌细胞膜上表达GLP-1受体；(2)：EX-4处理H9c2心肌细胞的最适浓度和时间分别为200μmol/L和45min。(3)：荧光酶标仪结果示：对照组荧光强度为369.78±59.69，EX-4组荧光强度为487.96±66.44，Insulin组荧光强度为458.09±26.41，EX-4组和Insulin组与对照组相比均促进H9c2心肌细胞葡萄糖摄取，分别增加24.2%和19.3%(p＜0.05)。(4)：流式细胞仪结果显示：2-NBDG对照组细胞内荧光强度为71.13±12.83，EX-4组细胞内荧光强度为119.77±15.32，BIRB79组细胞内荧光强度为90.75±4.08，EX-4组较对照组细胞内荧光强度增加40.6%，p＜0.05。加入p38MAPK通路抑制剂BIRB79后细胞葡萄糖摄取能力降低59.66%，p＜0.05。结论：EX-4可促进H9c2心肌细胞葡萄糖摄取，其机制可能与p38MAPK通路相关，且此作用并不依赖于刺激胰岛素分泌。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-10
ABSTRACT  10-14
前言  14-16
第一部分 2-NBDG 用于 H9c2 心肌细胞葡萄糖摄取实验的研究  16-29
  1 材料与方法  16-20
  2 结果  20-25
  3 讨论  25-26
  小结  26-27
  参考文献  27-29
第二部分 Exendin-4 对 H9c2 心肌细胞葡萄糖摄取的影响  29-43
  1 材料与方法  29-32
  2 结果  32-38
  3 讨论  38-40
  小结  40-41
  参考文献  41-43
全文总结  43-44
文献综述: GLP-1 对心脏保护作用的研究进展  44-52
  参考文献  49-52
致谢  52-53
在读硕士学位期间发表的论文  53-54

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