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表没食子儿茶素没食子酸酯体外对人结肠癌HT-29细胞生长抑制作用及机制研究

作　者: 蒋莎莉
导　师: 罗招阳
学　校: 南华大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 结肠癌 EGCG 细胞周期 p38MAPK Rb Cyclin D1
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 41次
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内容摘要

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallaocatechin-3-gallate,EGCG)对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,并初步探讨其分子机制。方法:体外培养人结肠癌HT-29细胞,采用MTT比色法检测EGCG对HT-29细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术分析EGCG对HT-29细胞周期分布的影响;使用免疫细胞化学、免疫印迹等方法观测EGCG对HT-29细胞周期相关蛋白(p53、PCNA、p38MAPK、RB)表达的影响。结果:MTT比色结果显示EGCG能呈浓度依赖性抑制HT-29细胞的增殖。不同浓度EGCG(30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml)对HT-29细胞(24h、48h、72h、96h)具有明显的生长抑制效应,并呈剂量-效应和时间-效应依赖关系(P<0.05);细胞活力检测结果显示,对照组与EGCG各浓度处理组细胞存活率差异无显著性(P>0.05);光镜下,与对照组比较,处理组瘤细胞稀疏,数量明显减少,细胞异型性变小,形态较为一致,胞浆较丰富,核变小,大小较为一致,核浆比例增大,核仁不明显,胞浆内细胞器丰富;流式细胞术分析结果显示,EGCG诱导人结肠癌细胞G1期阻滞,且随着处理时间的延长,其诱导周期阻滞的效应越明显(P<0.05),相同时间处理组,不同浓度处理与空白对照相比均发生了G1期阻滞(P<0.05);免疫细胞化学图像定量分析显示:经EGCG(50μg/mL,48h)处理后,人结肠癌HT-29细胞中p53、PCNA蛋白阳性率较未处理组显著降低(P<0.05);蛋白免疫印迹显示:EGCG能下调p38MAPK、RB蛋白的磷酸化水平,其作用与浓度和作用时间相关,能下调Cyclin D1蛋白的表达。结论:1.EGCG对体外培养的人结肠癌HT-29细胞具有明显的增殖抑制作用,并呈浓度-时间依赖关系。2.EGCG抑制HT-29细胞增殖作用与诱导细胞周期G1期阻滞有关。3.EGCG可能通过抑制p38MAPK、RB蛋白的磷酸化,下调Cyclin D1、p53、PCNA蛋白表达,诱导HT-29细胞G1期阻滞,抑制HT-29细胞增殖。

全文目录

一、中文摘要  4-6
二、英文摘要  6-8
三、正文  8-31
  （一）前言  8-10
  （二）材料和方法  10-15
  （三）结果  15-25
  （四）讨论  25-30
  （五）结论  30-31
四、参考文献  31-36
五、主要缩略语  36-37
六、文献综述  37-47
七、硕士期间发表的论文  47-48
八、致谢  48

表没食子儿茶素没食子酸酯体外对人结肠癌HT-29细胞生长抑制作用及机制研究

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