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外源性IL-10转染大鼠DC细胞诱导角膜移植免疫耐受的研究

作　者: 田丽华
导　师: 李兵
学　校: 辽宁医学院
专　业: 眼科学
关键词: 树突状细胞 IL-10 基因修饰角膜移植免疫耐受细胞因子
分类号: R779.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的1、研究IL-10 基因修饰后的大鼠树突状细胞（DC）的表型及其生物学特性。2、建立大鼠穿透性角膜移植模型，探讨外源性IL-10转染的大鼠树突状细胞在诱导同种异体角膜移植免疫耐受中的作用。方法1、以含IL-10基因的重组腺病毒载体体外转染大鼠骨髓来源的DC，实验分3组，培养6天的DC加入IL-10-GFP-Adenovirus转染48h后，继续培养至第12天，记做IL-10-GFP-DC组；培养6天的DC加入GFP-Adenovirus转染48h后，继续培养至第12天，记做GFP-DC组；不加任何处理，继续培养至第12天，记做12-DC组。Western blot测定转染后各组DC中IL-10蛋白的表达，流式细胞仪检测各组DC表面抗原CD83、CD86分子的表达情况，混合淋巴细胞反应法测定各组DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。2、动物实验分5组，阴性对照组：受体SD大鼠6只，未做任何处理。余4组以SD大鼠为受体、Wistar大鼠为供体建立同种异体角膜移植模型，每组20只，分别为：阳性对照组：术前3天受体大鼠尾静脉注射等量PBS；GFP-DC组：术前3天受体大鼠尾静脉注射2×106个转染48hGFP-Adenovirus的DC细胞；8-DC组：术前3天受体大鼠尾静脉注射2×106个培养8天的DC细胞；IL-10-GFP-DC组：术前3天受体大鼠尾静脉注射2×106个转染IL-10-GFP-Adenovir-us48h的DC细胞。每日观察角膜植片的状态，记录植片的生存时间，组织病理切片HE染色观察角膜植片的病理变化，RT-PCR方法检测各组术眼角膜细胞因子IL-10、TGF-β及IL-2的变化，ELISA方法检测各组术眼房水中细胞因子IL-4、IFN-γ的变化。结果1、IL-10基因修饰组DC可检测到IL-10高表达，表面抗原CD83、CD86低表达，其刺激T淋巴细胞增殖水平较其他各组低，差异具有统计学意义。GFP-DC组与12-DC组细胞表型及功能无差异。2、IL-10-GFP-DC组角膜植片的存活时间显著延长，HE染色示植片的水肿、炎性细胞浸润的程度轻，RT-PCR及ELISA方法检测IL-10-GFP-DC组细胞因子IL-10、TGF-β、 IL-4表达较其他各组高，而IL-2、IFN-γ的表达较其他各组低，差异具有统计学意义。结论1、转染IL-10基因可抑制树突状细胞的成熟，为研究未成熟DC诱导同种异体移植免疫耐受奠定了基础。2、IL-10基因修饰的未成熟树突状细胞能抑制角膜移植排斥反应，诱导免疫耐受的形成，延长角膜植片的存活时间。其中Th1/Th2偏离及TGF-β的高表达是诱导角膜移植免疫耐受的机制之一。

全文目录

中文论著摘要  5-7
英文论著摘要  7-9
英文缩略语表  9-10
前言  10-12
第一部分 IL-10 基因修饰的大鼠树突状细胞的表型分析及生物学特性的研究  12-23
  实验材料与方法  12-17
  实验结果  17-20
  讨论  20-22
  结论  22-23
第二部分外源性 IL-10 转染的大鼠 DC 细胞诱导角膜移植免疫耐受  23-38
  实验材料与方法  23-29
  实验结果  29-34
  讨论  34-37
  结论  37-38
本研究创新性自我评价  38-39
参考文献  39-43
附图  43-49
附录  49-61
  综述  49-58
    参考文献  54-58
  在学期间科研成绩  58-59
  致谢  59-60
  个人简介  60-61

外源性IL-10转染大鼠DC细胞诱导角膜移植免疫耐受的研究

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